| Platelet Migration and Bacterial Trapping Assay under Flow
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Author:
Date:
2018-09-20
[Abstract] Blood platelets are critical for hemostasis and thrombosis, but also play diverse roles during immune responses. We have recently reported that platelets migrate at sites of infection in vitro and in vivo. Importantly, platelets use their ability to migrate to collect and bundle fibrin (ogen)-bound bacteria accomplishing efficient intravascular bacterial trapping. Here, we describe a method that allows analyzing platelet migration in vitro, focusing on their ability to collect bacteria and trap bacteria under flow.
[摘要] 血小板对于止血和血栓形成至关重要，但在免疫反应中也起着不同的作用。 我们最近报道了血小板在体外体外和体内感染部位迁移。 重要的是，血小板利用它们迁移的能力来收集和捆绑纤维蛋白（ogen）结合的细菌，从而实现有效的血管内细菌捕获。 在这里，我们描述了一种方法，允许分析血小板在体外的迁移，重点是它们收集细菌和捕获流动细菌的能力。
【背景】血小板是从巨核细胞释放的小的无核细胞片段，其存在于哺乳动物生物的骨髓内（Machlus和Italiano，2013）。大约7500亿血小板在人体血液中循环，不断扫描脉管系统以破坏内皮表面。在遇到内皮损伤时，血小板立即被招募在充分表征的事件级联中，包括初始血小板束缚和滚动，然后是血小板活化，粘附和扩散，最终导致纤维蛋白（ogen）依赖性聚集和随后的血栓收缩（Jackson， 2007）。血小板栓塞形成是生理性止血的主要步骤，但也是动脉粥样硬化斑块破裂后的病理性血栓形成，触发心肌梗塞或中风（Jackson，2011）。
除了在止血和血栓形成中的公认作用外，血小板还发展出多种免疫功能（Semple et al。，2011）。作为第一批招募炎症和感染部位的细胞，血小板在启动血管内免疫反应中起着重要作用（Wong et ...
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| FRAP: A Powerful Method to Evaluate Membrane Fluidity in Caenorhabditis elegans
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Author:
Date:
2018-07-05
[Abstract] FRAP (Fluorescence Recovery After Photobleaching) is probably the most direct method to investigate the dynamics of molecules in living cells. Here, we describe FRAP to quantify membrane fluidity in C. elegans. Using FRAP, we have shown that cold, glucose and exogenous saturated fatty acids can decrease the fluidity of cellular membranes in certain mutants.
[摘要] FRAP（光漂白后的荧光恢复）可能是研究活细胞中分子动力学的最直接方法。 在这里，我们描述FRAP来量化 C中的膜流动性。线虫。 使用FRAP，我们已经表明冷，葡萄糖和外源饱和脂肪酸可以降低某些突变体中细胞膜的流动性。
【背景】生物膜，定义所有细胞的特征，主要由磷脂组成（Van Meer 等人，，2008）。存在于磷脂双层中的脂肪酸物质极大地影响其性质。例如，高饱和脂肪酸含量增加了膜的刚性，而高不饱和脂肪酸含量促进了流动性（Pilon，2016）。细胞膜的脂肪酸组成通常与膳食脂肪的组成明显相关，膳食脂肪可直接掺入磷脂中（Abbott et al。，2012; Dancy et al。，2015）。然而，考虑到饮食中存在广泛的变化，细胞必须具有调节机制，监测和调节膜组成并获得所需的膜性质，例如流动性，曲率，厚度，等等。使用FRAP对在肠道细胞中表达prenylated GFP的蠕虫，我们先前已经证明，缺乏PAQR-2（哺乳动物脂联素受体的同源物）的突变体在葡萄糖或富含饱和脂肪的饮食中培养时降低了膜流动性。酸（Svensk et al。，2016; Devkota et ...
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| A Quick and Easy Method for Making Competent Escherichia coli Cells for Transformation Using Rubidium Chloride
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Author:
Date:
2017-11-05
[Abstract] This protocol describes a quick and efficient method to make competent E. coli cells for transformation using rubidium chloride. Commercial competent cells are expensive and this protocol provides a cheaper alternative to them.
[摘要] 这个协议描述了一个快速有效的方法来做出胜任的E。 使用氯化铷转化大肠杆菌细胞。 商业感受态细胞是昂贵的，这个协议提供了一个更便宜的选择。
【背景】基因克隆的成功高度依赖于细菌细胞的转化效率。 通过用化学物质或电脉冲处理细胞可以人为地提高效率。 有几个协议可用于准备主管的E。 然而，它们通常是长期的，费力的，并且在能力上表现出不一致。 Green和Rogers（2013）的方案克服了这些缺点，并允许制备高感受态细胞（〜10 6 -10 8 CFU /μgDNA）。 虽然其他协议要求细胞在低温（19-22°C）下生长，但该协议涉及在37°C下生长细胞。 因此，与18-24小时相比，细胞生长更快并且在4小时内达到对数期。 该协议是高度可重复的。
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