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Magnesium chloride hexahydrate

氯化镁六水合物

Company: Sigma-Aldrich
Catalog#: M2670
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Analysis of Metals in Whole Cells, Thylakoids and Photosynthetic Protein Complexes in Synechocystis sp. PCC6803
Author:
Date:
2018-06-20
[Abstract]  Metals are essential in many biological processes, including oxygenic photosynthesis. Here we described a method to measure the metal pool in whole cells and thylakoids, including the bioactive pool in intact photosynthetic protein complexes in the model oxygenic cyanobacterium Synechocystis PCC6803. In the first part of the protocol, whole cells and thylakoid membranes are carefully prepared, in which the total metal concentrations are measured by inductively coupled plasma triple-quadrupole mass spectrometry (ICP-QQQ-MS). In the second part of the protocol, isolated thylakoids are solubilized to release the integral membrane proteins and the metal binding protein complexes. These intact photosynthetic protein complexes are subjected to size exclusion chromatography (SEC) and ... [摘要]  金属在许多生物过程中是必不可少的,包括含氧光合作用。 在这里我们描述了测量全细胞和类囊体中金属库的方法,包括模型含氧蓝藻PCH6803中完整光合蛋白复合体中的生物活性库。 在方案的第一部分中,仔细制备全细胞和类囊体膜,其中通过电感耦合等离子体三重四极杆质谱(ICP-MS / MS)测量总金属浓度。 在该方案的第二部分,分离的类囊体被溶解以释放完整的膜蛋白和金属结合蛋白复合物。 将这些完整的光合蛋白复合物进行尺寸排阻色谱(SEC),并通过ICP-MS / MS进行连接分析尺寸分离的复合物中的金属结合。

【背景】氧光合作用的过程需要金属,因为它们在光合电子传递链中作为辅因子和催化剂的基本功能。光合装置需要Fe-S簇,血红素桥Fe和非血红素Fe形式的铁(Fe),可溶性移动电子载体蛋白质质体蓝素中的铜(Cu),叶绿素中的镁(Mg), ...

Guanine Nucleotide Exchange Assay Using Fluorescent MANT-GDP
Author:
Date:
2018-04-05
[Abstract]  GTPases are molecular switches that cycle between the inactive GDP-bound state and the active GTP-bound state. GTPases exchange nucleotides either by its intrinsic nucleotide exchange or by interaction with guanine nucleotide exchange factors (GEFs). Monitoring the nucleotide exchange in vitro, together with reconstitution of direct interactions with regulatory proteins, provides key insights into how a GTPase is activated. In this protocol, we describe core methods to monitor nucleotide exchange using fluorescent N-Methylanthraniloyl (MANT)-guanine nucleotide. [摘要]  GTP酶是分子开关,在无效GDP结合状态和活性GTP结合状态之间循环。 GTP酶通过其内在的核苷酸交换或通过与鸟嘌呤核苷酸交换因子(GEF)的相互作用来交换核苷酸。 监测体外核苷酸交换,以及与调节蛋白直接相互作用的重构,为GTP酶如何被激活提供了重要见解。 在该协议中,我们描述了使用荧光N-甲基呋喃酰基(MANT) - 鸟嘌呤核苷酸来监测核苷酸交换的核心方法。

【背景】GTPase是鸟嘌呤核苷酸结合蛋白,调节细胞过程的广度,从蛋白质生物合成到细胞周期进展,从细胞骨架重组到膜运输。 GTPases可以被认为是分子开关,它在GDP结合“关闭”状态和GTP结合“开启”状态之间循环;在通过GTP的GDP核苷酸交换结合GTP时,GTP酶变得活跃并且将结合下游效应蛋白以招募和激活这些效应子的生物学功能。 GTP酶通过与开关I环(G2结构域)的高度保守苏氨酸和开关II环(G3结构域)的DxxG基序内的甘氨酸的相互作用结合GTP的γ-磷酸。 GTP水解后,与γ-磷酸相互作用的丧失导致动态构象变化,从而使GTPase变为关闭状态(Vetter and ...

Determining Ribosome Translational Status by Ribo-ELISA
Author:
Date:
2018-01-05
[Abstract]  The Ribo-ELISA was originally developed to elucidate the basis for the ribopuromycylation method (RPM)-based detection of ribosome bound nascent chains. The Ribo-ELISA enables characterization of the translational status of ribosomes, and can be applied to the discovery of super-ribosomal complexes with novel ribosome associated macromolecules that are isolated by physical fractionation in sucrose gradients or other methods. [摘要]  Ribo-ELISA最初是为阐明基于核糖核苷酸化方法(RPM)的核糖体结合新生链检测的基础而开发的。 Ribo-ELISA能够表征核糖体的翻译状态,并且可以应用于通过蔗糖梯度中的物理分离或其他方法分离的新型核糖体相关大分子的超核糖体复合物的发现。

【背景】核糖体是由40S和60S亚单位组成的异构结构,当多个核糖体与单个mRNA结合时,它们以单体和多核糖体存在于细胞中。 另外,翻译核糖体可以与调节翻译的多个分子复合物相关联。 核糖体ELISA(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay)能够通过核糖体相关新生链的体外嘌呤化检测翻译核糖体(David等人,2012)。 在将嘌呤霉素添加至具有结合的新生链的核糖体时,这种化学反应自发进行。 该方法定量测定每个核糖体中出现的新生链的数量,并且可以用于确定单核细胞相对于多核糖体的翻译状态,并鉴定结合其他大分子的核糖体,其改变其在沉淀柱中的沉降速率或迁移。

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