| Isolation and Separation of Epithelial CD34+ Cancer Stem Cells from Tgfbr2-deficient Squamous Cell Carcinoma
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Author:
Date:
2017-09-05
[Abstract] Most epithelial tumors have been shown to contain cancer stem cells that are potentially the driving force in tumor progression and metastasis (Kreso and Dick, 2014; Nassar and Blanpain, 2016). To study these cells in depth, cell isolation strategies relying on cell surface markers or fluorescent reporters are essential, and the isolation strategies must preserve their viability. The ability to isolate different populations of cells from the bulk of the tumor will continue to deepen our understanding of the biology of cancer stem cells. Here, we report the strategy combining mechanical tumor dissociation, enzymatic treatment and flow cytometry to isolate a pure population of epithelial cancer stem cells from their native microenvironment. This technique can be useful to further ...
[摘要] 大多数上皮肿瘤已经显示含有可能是肿瘤进展和转移的驱动力的癌症干细胞（Kreso和Dick，2014; Nassar和Blanpain，2016）。 为了深入研究这些细胞，依赖于细胞表面标志物或荧光报告基因的细胞分离策略是必不可少的，分离策略必须保持其活力。 从大部分肿瘤中分离不同细胞群的能力将继续加深我们对癌症干细胞生物学的认识。 在这里，我们报告了结合机械肿瘤解离，酶处理和流式细胞术的策略，从其天然微环境中分离出纯种群的上皮癌干细胞。 该技术可用于进一步功能性地分析癌症干细胞（RNA测序和表观遗传学分析），在培养物中培养它们或在移植测定中直接使用它们。
【背景】肿瘤复发和转移是大多数与癌症有关的死亡的主要原因。恶性肿瘤可能由干细胞群体启动和维持（Nassar和Blanpain，2016; Bonnet和Dick，1997），这些细胞是预防复发的重要治疗靶点（Baumann et al。，2008）。研究表明，鳞状细胞癌由肿瘤干细胞亚群维持，其抗药性，并通过进行自我更新和分化（如正常干细胞）引发肿瘤复发，产生增殖祖细胞，其分化形成肿瘤大部分（Locke et al。，2005; Prince et al。，2007; Malanchi et al。，2008; de Sousa e Melo et ...
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| Isolation, Culturing, and Differentiation of Primary Myoblasts from Skeletal Muscle of Adult Mice
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Author:
Date:
2017-05-05
[Abstract] Myogenesis is a multi-step process that leads to the formation of skeletal muscle during embryonic development and repair of injured myofibers. In this process, myoblasts are the main effector cell type which fuse with each other or to injured myofibers leading to the formation of new myofibers or regeneration of skeletal muscle in adults. Many steps of myogenesis can be recapitulated through in vitro differentiation of myoblasts into myotubes. Most laboratories use immortalized myogenic cells lines that also differentiate into myotubes. Although these cell lines have been found quite useful to delineating the regulatory mechanisms of myogenesis, they often show a great degree of variability depending on the origin of the cells and culture conditions. Primary myoblasts have been ...
[摘要] 造血是一种多步骤过程，导致在损伤的肌纤维的胚胎发育和修复期间骨骼肌的形成。在这个过程中，成肌细胞是主要的效应细胞类型，彼此融合或损伤肌纤维，导致新成肌纤维的形成或成年人骨骼肌的再生。通过体外成骨细胞分化成肌管可以概括出许多发生肌肉发育的步骤。大多数实验室使用也分化成肌管的永生化肌原细胞系。虽然已经发现这些细胞系对于描绘造血的调节机制非常有用，但是它们通常依赖于细胞的来源和培养条件而显示出很大的变异性。原代成肌细胞被认为是体外研究肌生成的最生理学相关模型。然而，由于成体骨骼肌的丰度低，原代成肌细胞的分离在技术上是有挑战性的。在本文中，我们描述了一种用于从小鼠的成年骨骼肌分离原代成肌细胞的改进方案。我们还描述了其培养和分化成肌管的方法。
背景 造血是一个复杂而高度协调的过程，其涉及多潜能中胚层细胞的测定，以产生成肌细胞，成肌细胞从细胞周期中排出，以及它们最终分化为骨骼肌纤维。 Myogen-5，MyoD，myogenin和MRF4的基因螺旋 - 环 - 螺旋转录因子的一组基因调控因子（MRFs）的顺序表达调控。 Myf-5和MyoD是成肌细胞形成，增殖和存活所需的主要MRFs，而其他MRF（如肌细胞生成素和MRF-4）在肌发生过程中起作用迟发，激活收缩蛋白和其他结构和代谢蛋白的基因表达（白金汉，2003; ...
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| A Murine Orthotopic Allograft to Model Prostate Cancer Growth and Metastasis
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Author:
Date:
2017-02-20
[Abstract] Prostate cancer is one of the most common cancers in men in the United States. Comprehensive understanding of the biology contributing to prostate cancer will have important clinical implications. Animal models have greatly impacted our knowledge of disease and will continue to be a valuable resource for future studies. Herein, we describe a detailed protocol for the orthotopic engraftment of a murine prostate cancer cell line (Myc-CaP) into the anterior prostate of an immune competent mouse.
[摘要] 前列腺癌是美国男性最常见的癌症之一。对前列腺癌生物学的全面了解将具有重要的临床意义。动物模型大大影响了我们对疾病的了解，并将继续成为未来研究的宝贵资源。在这里，我们描述了将一种鼠前列腺癌细胞系（Myc-CaP）原位植入免疫能力小鼠前列腺的详细方案。
背景 由于转移的癌症的一小部分，前列腺癌是男性癌症死亡的主要原因。然而，驱动局部肿瘤发展和进展为转移性疾病的遗传和分子因素仍未完全了解。基因工程小鼠（GEM）模型和前列腺癌的异种移植模型都有助于我们对前列腺癌遗传学的了解（Ittmann等人，2013; Park等人，2010）。通过前列腺特异性转基因过表达如Hi-Myc小鼠（Ellwood-Yen等人，2003）或通过前列腺特异性缺失例如在Pten中的遗传操作， - 小鼠（Wang等人，2003）是有利的，因为它模拟了免疫能力小鼠的器官微环境中的肿瘤发展和进展。转移性前列腺癌的发展在这些GEM模型中是可变的，其中一些低频率, 其他模型如TRAMP（转基因腺癌小鼠前列腺）（reenberg等，1995）和Hi-Myc / Pten < -=""> （Hubbard等人，2016）。尽管他们对前列腺癌研究有很大的实用价值，但进一步的遗传操纵GEM模型是困难，耗时和昂贵的。为了克服这些局限性，研究人员依赖于人类细胞系的皮下和原位异种移植物。细胞系可以以多种方式在体外进行遗传操作。虽然皮下异种移植物由于其易于注射和监测而是有利的，但原位异种移植物更好地概括了可能影响药物敏感性的局部肿瘤微环境（Wilmann等人，1992; ...
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