| Analysis of Xyloglucan Composition in Arabidopsis Leaves
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Author:
Date:
2017-10-05
[Abstract] Xyloglucan is one of the main components of the primary cell wall in most species of plants. This protocol describes a method to analyze the composition of the enzyme-accessible and enzyme-inaccessible fractions of xyloglucan in the model species Arabidopsis thaliana. It is based on digestion with an endoglucanase that attacks unsubstituted glucose residues in the backbone. The identities and relative amounts of released xyloglucan fragments are then determined using MALDI-TOF mass spectrometry.
[摘要] 木葡聚糖是大多数植物种类中主要细胞壁的主要成分之一。 该方案描述了一种分析拟南芥拟南芥中木葡聚糖的可酶酶和不可酶酶级分的组成的方法。 它是基于内切葡聚糖酶的消化，其攻击骨架中的未取代的葡萄糖残基。 然后使用MALDI-TOF质谱法测定释放的木葡聚糖片段的身份和相对量。
【背景】在许多开花植物中，木葡聚糖是主要细胞壁的主要成分，其在生长调节中起重要作用。顺序提取方案提供了分离不同木葡聚糖结构域的方法（Pauly et al。，1999）。一些木葡聚糖似乎被捕获在纤维素微原纤维内，而另一部分通过氢键结合到它们的表面。木葡聚糖的其余部分（可能大多数）占据了微原纤维之间的距离（Park和Cosgrove，2015）。可以通过细胞壁材料的直接内切葡聚糖酶消化来提取部分后来的木葡聚糖。然后可以通过碱处理释放大部分剩余的木葡聚糖。缺乏木葡聚糖外切糖苷酶的突变体的研究表明，这些酶与葡聚糖内切葡糖基酶/水解酶一起主要作用于酶易接近部分（Sampedro等人，2010;Günl和Pauly，2011;Günl ，2011; Sampedro等人，2012; Sampedro等人，2017）。消化拟南芥木葡聚糖与内切葡聚糖酶攻击未经取代的葡萄糖残基导致三个和四个葡萄糖亚基的混合物，可以通过MALDI-TOF质谱快速和容易地分析（Lerouxel等人， ...
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| Isolation and Quantification of Plant Extracellular Vesicles
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Author:
Date:
2017-09-05
[Abstract] Extracellular vesicles (EVs) play an important role in intercellular communication by transporting proteins and RNA. While plant cells secrete EVs, they have only recently been isolated and questions regarding their biogenesis, release, uptake and function remain unanswered. Here, we present a detailed protocol for isolating EVs from the apoplastic wash of Arabidopsis thaliana leaves. The isolated EVs can be quantified using a fluorometric dye to assess total membrane content.
[摘要] 细胞外囊泡（EVs）通过传递蛋白质和RNA在细胞间通讯中发挥重要作用。 虽然植物细胞分泌电动汽车，但是它们最近才被孤立，并且关于它们的生物发生，释放，摄取和功能的问题仍然没有得到回答。 在这里，我们提出了一个详细的方案，用于从拟南芥叶片的脱水洗涤中分离EV。 可以使用荧光染料定量分离的EV，以评估总膜含量。
【背景】细胞外囊泡（EVs）是介导蛋白质，脂质和遗传物质的细胞与细胞转移的膜结合结构。由于哺乳动物EVs转运RNA和调节免疫反应的能力，对哺乳动物EV的兴趣已经增长。哺乳动物EV通常被分离用于从培养细胞的培养基中研究，以及生物流体的增长列表（Colombo等，2014）。植物电动车也被认为在免疫反应中起作用，但比较缺乏（An et al。，2007; Davis et al。，2016）。这在很大程度上归因于没有孤立的方法。
虽然植物EVs自1967年以来一直被观察到，使用透射电子显微镜，但直到2009年才开发出分离方法（Halperin和Jensen，1967）。 ...
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| Isolation of Rodent Brain Vessels
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Author:
Date:
2017-09-05
[Abstract] The prevalence of neurodegenerative diseases is increasing worldwide. Cerebrovascular disorders and/or conditions known to affect brain vasculature, such as diabetes, are well-known risk factors for neurodegenerative diseases. Thus, the evaluation of the brain vasculature is of great importance to better understand the mechanisms underlying brain damage. We established a protocol for the isolation of brain vessels from rodents. This is a simple, non-enzymatic isolation protocol that allows us to perform comparative studies in different animal models of disease, helping understand the impact of several pathological conditions on brain vasculature and how those alterations predispose to neurodegenerative conditions.
[摘要] 全世界神经退行性疾病的发病率正在增加。 已知会影响脑血管系统的脑血管疾病和/或病症，如糖尿病，是神经变性疾病的众所周知的危险因素。 因此，脑血管系统的评估对于更好地了解脑损伤的机制是非常重要的。 我们建立了从啮齿动物分离脑血管的方案。 这是一个简单的非酶分离方案，允许我们在不同的疾病动物模型中进行比较研究，帮助了解几种病理状况对脑血管系统的影响以及这些改变如何易于发生神经退行性疾病。
【背景】大脑高度依赖于通过庞大的血管网络到达的氧气和营养物质的不断供应。主要由微血管内皮细胞组成的血脑屏障（BBB），其包括脑内微血管以及周围结构，包括周细胞，星形胶质细胞和基底膜（Saraiva等，2016; Librizzi等，2017），保证控制稳态环境，保持脑细胞的健康。因此，研究如何干扰脑血管系统完整性的某些病理学是非常重要的。事实上，临床，成像，流行病学和神经病理学研究的有力证据证实了过去二十年来，脑血管疾病的存在在阿尔茨海默病（AD）和其他与衰老有关的痴呆中具有关键作用（Chui et al。，2006; Schneider et al。，2007; Gorelick et al。，2011; Wharton et al。，2011; Yarchoan et al。，2012; Bennett et al。，2013; DeCarli，2013; Toledo et ...
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