{{'Search' | translate}}
 

L-Cysteine

L-半胱氨酸

Company: Sigma-Aldrich
Catalog#: C7352
Bio-protocol()
Company-protocol()
Other protocol()

Assessment of Modulation of Protein Stability Using Pulse-chase Method
Author:
Date:
2017-08-20
[Abstract]  Pulse-chase technique is a method widely used to assess protein or mRNA stability. The principle of pulse-chase relies on labeling proteins or mRNA produced during a short period of time called ‘pulse’ and then following the rate of disappearance of those labeled proteins over a period of time called ‘chase’. This technique thus allows quantitative analysis of modulation of protein or mRNA stability under different treatments or culturing conditions. [摘要]  脉冲追踪技术是广泛用于评估蛋白质或mRNA稳定性的方法。 脉冲追踪的原理依赖于在短时间内产生的称为“脉冲”的蛋白质或mRNA的标记,然后遵循称为“追逐”的时间段内那些标记蛋白质的消失速率。 因此,该技术允许在不同处理或培养条件下对蛋白质或mRNA稳定性的调节进行定量分析。
【背景】脉冲追踪技术是一种方法,其涉及在称为“脉冲”的短时间内在含有标记氨基酸的培养基中培养细胞。这导致结合标记的氨基酸的新合成的多肽的产生。脉冲步骤之后是“追逐”步骤,其中洗涤标记培养基以终止标记过程,并被具有非标记氨基酸的培养基代替,以允许在任何给定时间定量初始合成的放射性标记的蛋白质在这个追逐阶段。因此,该技术可以及时地从合成到降解的方法定量分析感兴趣的蛋白质的加工。脉冲追踪方法可用于分析蛋白质折叠,共翻译修饰和细胞内运输等各种过程(Jansens和Braakman 2003;Magadán,2014)。然而,脉冲追踪技术最常用于评估不同实验条件下蛋白质的稳定性。
   放射性是常用的标签。标签通常用于使用放射性S35甲硫氨酸的蛋白质。放射性标记的蛋白质的消失动力学依赖于这些蛋白质降解的速度,可以用来检验不同实验条件对蛋白质稳定性的影响。为了评估特定目的蛋白质的稳定性,该蛋白质在使用特异性抗体在脉冲期间产生的所有其它免疫标记的蛋白质免疫沉淀。免疫沉淀将分离在脉冲期间产生并且直到免疫沉淀时尚未降解的放射性标记的蛋白质的比例。然后测量放射性以评估标记蛋白质在一段时间内的相对量。 ...

Endpoint or Kinetic Measurement of Hydrogen Sulfide Production Capacity in Tissue Extracts
Author:
Date:
2017-07-05
[Abstract]  Hydrogen sulfide (H2S) gas is produced in cells and tissues via various enzymatic processes. H2S is an important signaling molecule in numerous biological processes, and deficiencies in endogenous H2S production are linked to cardiovascular and other health complications. Quantitation of steady-state H2S levels is challenging due to volatility of the gas and the need for specialized equipment. However, the capacity of an organ or tissue extract to produce H2S under optimized reaction conditions can be measured by a number of current assays that vary in sensitivity, specificity and throughput capacity. We developed a rapid, inexpensive, specific and relatively high-throughput method for quantitative detection of H2S ... [摘要]  通过各种酶法在细胞和组织中产生硫化氢(H 2 S)。 H 2 S是许多生物过程中重要的信号分子,内源性H 2 S生产的缺陷与心血管和其他健康并发症有关。稳态H 2 S水平的定量是由于气体的挥发性和专门设备的需要而具有挑战性的。然而,器官或组织提取物在优化的反应条件下产生H 2 S的能力可以通过许多灵敏度,特异性和通过能力变化的现有测定来测量。我们开发了用于从生物组织定量检测H 2 S生产能力的快速,廉价,特异性和相对高通量的方法。释放到生物样品上方的头部空间中的H 2 S 2与乙酸铅反应形成硫化铅,其使用平板阅读器或作为终点测定法连续测量。
【背景】通过哺乳动物(CGL,CBS,3-MST)中的至少三种不同的酶以一定范围的组织和细胞类型分布内源性地产生硫化氢(H 2 S)。 H 2 S作为与代谢相关的广泛生物学功能的气体发射器和效应分子(Wang,2012)起作用(Módiset al。,2013),应力抵抗(Hine等人,2015)和氧化还原生物学(Dickhout et al。,2012)。减少的H 2 S与心血管问题有关,包括啮齿动物中的高血压(Yang等人,2008)和人心脏肥大(Polhemus等人, ,2014)。增加的H 2 S也可引起病理学,例如啮齿动物胰腺炎(Bhatia et al。,2005)。因此,从生物来源准确和定量地检测H 2 ...

Determination of the in vitro Sporulation Frequency of Clostridium difficile
Author:
Date:
2017-02-05
[Abstract]  The anaerobic, gastrointestinal pathogen, Clostridium difficile, persists within the environment and spreads from host-to-host via its infectious form, the spore. To effectively study spore formation, the physical differentiation of vegetative cells from spores is required to determine the proportion of spores within a population of C. difficile. This protocol describes a method to accurately enumerate both viable vegetative cells and spores separately and subsequently calculate a sporulation frequency of a mixed C. difficile population from various in vitro growth conditions (Edwards et al., 2016b). [摘要]  厌氧,胃肠道病原体,艰难梭菌在环境中持续存在,并通过其感染形式,孢子从宿主到宿主传播。为了有效地研究孢子形成,需要从孢子中进行营养细胞的物理分化以确定在C群体内孢子的比例。艰难的。该方案描述了分别精确地枚举活的营养细胞和孢子的方法,并随后计算混合的孢子形成频率。来自各种体外生长条件(Edwards等人,2016b)的难治性群体。

背景 孢子形成是一个复杂的发育过程,导致代谢休眠孢子的形成。 C的物理性质。艰难的孢子形式提供了许多环境胁迫和消毒剂的内在抵抗,允许其在宿主之外的长期生存(参见:Paredes-Sabja等人,2014年)。区分营养细胞和C孢子。已经开发了利用孢子的物理和抗性属性的各种技术,包括短时间暴露于湿热或乙醇(Burns等人,2010; Lawley& et al。,2010; Edwards等人,2014)。然而,根据C的应变,这些技术可能不经意地对孢子造成长期损害。难以测试,导致恢复率不准确。在这里,我们描述了使用比以前描述的较低浓度的乙醇(40%以下的乙醇)的优化方法以消除异质C中的所有营养细胞。艰难梭菌群体,而不降低孢子的生存力。该技术为量化C提供了高度可重现性和较不可变的结果。难产孢子孢子形成。

Comments