| Isolation and Primary Culture of Various Cell Types from Whole Human Endometrial Biopsies
|
|
Author:
Date:
2016-11-20
[Abstract] The isolation and primary culture of cells from human endometrial biopsies provides valuable experimental material for reproductive and gynaecological research. Whole endometrial biopsies are collected from consenting women and digested with collagenase and DNase I to dissociate cells from the extracellular matrix. Cell populations are then isolated through culturing, filtering and magnetic separation using cell-surface antigen markers. Here we provide a comprehensive protocol on how to isolate and culture individual cell types from whole endometrial tissues for use in in vitro experiments.
[摘要] 从人子宫内膜活组织检查中分离和原代培养细胞为生殖和妇科研究提供了有价值的实验材料。从同意的妇女收集完整的子宫内膜活检组织并用胶原酶和DNA酶I消化以从细胞外基质中分离细胞。然后通过使用细胞表面抗原标记物的培养，过滤和磁性分离来分离细胞群。在这里，我们提供了如何从整个子宫内膜组织分离和培养个体细胞类型以用于体外实验的全面方案。
[背景] 人子宫内膜是子宫内层最粘的层。其由柱状上皮和基础基质层组成，其经历循环再生，生长和响应于循环激素的转化。子宫内膜衬里分化为腺分泌表型为囊胚植入和成功怀孕提供了一个好客的环境。在没有怀孕这个层脱落，导致月经。从人子宫内膜活组织检查中分离和培养细胞允许在体外功能评估和与患者结果相关的细胞特征的研究。子宫内膜细胞的分离和培养是研究妇科和产科医学的许多方面的非常宝贵的研究模型，包括不孕，植入失败，复发性流产和月经紊乱。全人子宫内膜活检包含人子宫内膜基质细胞（HESCs），腔和子宫内膜上皮细胞（HEEC），红细胞和免疫细胞的混合群体。 ...
|
|
|
| Primary Neuron-glia Culture from Rat Cortex as a Model to Study Neuroinflammation in CNS Injuries or Diseases
|
|
Author:
Date:
2016-04-20
[Abstract] Primary neuron-glia cultures are commonly used in vitro model for neurobiological studies. Here, we provide a protocol for the isolation and culture of neuron-glial cells from cortical tissues of 1-day-old neonatal Sprague-Dawley pups. The procedure makes available an easier way to obtain the neuron and glia. In this culture system, neuron-glia cultures consisted of approximately 37% neurons, 51% astrocytes, 7% microglia, and a small percentage (<5%) of other cells after fourteen days in vitro. Primary neuron-glia cultures is a simplified in vitro model for studies focusing on interactions between neurons and glia cells. Activated glial cells, mainly astrocytes and microglia, are histopathological hallmarks of acute injury of the central nervous system (CNS) ...
[摘要] 原代神经元 - 神经胶质培养物通常用于神经生物学研究的体外模型。在这里，我们提供的隔离和培养的神经元胶质细胞从1日龄新生儿Sprague-Dawley幼崽的皮质组织的协议。该程序提供了一种更容易的方式来获得神经元和神经胶质。在该培养系统中，神经元 - 神经胶质培养物在体外14天后由约37％神经元，51％星形胶质细胞，7％小胶质细胞和小百分比（<5％）的其他细胞组成。原代神经元胶质细胞培养物是用于研究的简化的体外模型，其关注于神经元和神经胶质细胞之间的相互作用。活化的胶质细胞，主要是星形胶质细胞和小神经胶质细胞，是中枢神经系统（cns）或慢性神经疾病的急性损伤的组织病理学标志（hirsch和hunot，2009; lee等人，2009; minghetti， 2005）。由活化神经胶质释放的炎性介质（例如一氧化氮，活性氧，促炎细胞因子和趋化因子）可直接或间接引起神经元损伤或神经变性。神经炎症是导致神经变性的各种神经疾病的常见机制。神经胶质细胞培养的优点是：（1）培养的细胞可以在体内绕过复杂的生理相互作用（例如白细胞浸润，血脑屏障，反射或其他系统调节）以允许直接观察（缺氧，缺血，创伤，感染，神经毒素，慢性应激或疾病）引起的神经炎症; （2）与主要源自肿瘤细胞的细胞系不同，原代培养的神经元 - 神经胶质系统更接近于体内细胞群体比率，并且可以模拟原位微环境;和（3）可以从各种脑区域（例如皮质，海马，中脑等）制备培养物，并且允许有机会检查对神经变性的易感性的区域差异随后由各种cns损伤引起的神经炎症（kim等人，2000）。以下方案是原代大鼠皮质神经元 - 神经胶质培养物制备的实例（huang等人，2015; huang等人，2014; huang等人。，2012; huang ，，2009）。
lee等人，2009;="" minghetti，="" 2005）。由活化神经胶质释放的炎性介质（例如一氧化氮，活性氧，促炎细胞因子和趋化因子）可直接或间接引起神经元损伤或神经变性。神经炎症是导致神经变性的各种神经疾病的常见机制。神经胶质细胞培养的优点是：（1）培养的细胞可以在体内绕过复杂的生理相互作用（例如白细胞浸润，血脑屏障，反射或其他系统调节）以允许直接观察（缺氧，缺血，创伤，感染，神经毒素，慢性应激或疾病）引起的神经炎症;="" （2）与主要源自肿瘤细胞的细胞系不同，原代培养的神经元="" -="" 神经胶质系统更接近于体内细胞群体比率，并且可以模拟原位微环境;和（3）可以从各种脑区域（例如皮质，海马，中脑等）制备培养物，并且允许有机会检查对神经变性的易感性的区域差异随后由各种cns损伤引起的神经炎症（kim等人，2000）。以下方案是原代大鼠皮质神经元="" -="" 神经胶质培养物制备的实例（huang等人，2015;="" huang等人，2014;="" huang等人。，2012;="" huang="" ，，2009）。=""> ...
|
|
|
| siRNA Screening for Genes Involved in HSV-1 Replication
|
|
Author:
Date:
2014-08-20
[Abstract] Small interfering RNAs (siRNAs) are small (typically 18-24 nucleotides) RNA molecules capable of silencing gene expression post-transcriptionally and as such, they provide a simple method by which the role of individual genes in complex cellular systems can be easily assessed. As siRNAs are easy to use experimentally, and can be designed to target any gene (including pathogens), their use is perfectly suited to and easily adapted to high-throughput genome-wide screening methodologies and a range of phenotypic assays. Here we describe the use of a large siRNA library (>8,000 genes targeted individually) to screen for and identify host factors functionally involved in the replication of a human herpesvirus (Herpes simplex virus type 1; HSV-1) (Griffiths et al., 2013; Griffiths, ...
[摘要] 小干扰RNA（siRNA）是能够沉默转录后基因表达的小（通常为18-24个核苷酸）RNA分子，因此，它们提供了一种简单的方法，通过其可以容易地评估单个基因在复杂细胞系统中的作用。 由于siRNA易于实验使用，并且可以设计为靶向任何基因（包括病原体），它们的使用完全适合于并且容易地适应于高通量全基因组筛选方法学和一系列表型测定。 这里我们描述了使用大的siRNA文库（> 8,000个基因单独靶向）来筛选和鉴定功能上涉及人疱疹病毒（1型单纯疱疹病毒; HSV-1）（Griffiths）的复制的宿主因子， et al。，2013; Griffiths，2013）。
|
|
|