| Bioelectrospray Methodology for Dissection of the Host-pathogen Interaction in Human Tuberculosis
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Author:
Date:
2017-07-20
[Abstract] Standard cell culture models have been used to investigate disease pathology and to test new therapies for over fifty years. However, these model systems have often failed to mimic the changes occurring within three-dimensional (3-D) space where pathology occurs in vivo. To truthfully represent this, an emerging paradigm in biology is the importance of modelling disease in a physiologically relevant 3-D environment. One of the approaches for 3-D cell culture is bioelectrospray technology. This technique uses an alginate-based 3-D environment as an inert backbone within which mammalian cells and extracellular matrix can be incorporated. These alginate-based matrices produce highly reproducible results and can be mixed with different extracellular matrix components. This protocol ...
[摘要] 标准细胞培养模型已被用于调查疾病病理学和测试新疗法超过五十年。 然而，这些模型系统通常未能模拟在体内发生病理学的三维（3-D）空间内发生的变化。 为了真实地表示这一点，生物学中新兴的范例是在生理相关的三维环境中建模疾病的重要性。 3-D细胞培养的方法之一是生物电喷雾技术。 该技术使用基于藻酸盐的3-D环境作为惰性骨架，其中可以并入哺乳动物细胞和细胞外基质。 这些基于藻酸盐的基质产生高度可重复的结果，并且可以与不同的细胞外基质组分混合。 该方案描述了一种结合分枝杆菌，原代人血液单核细胞和胶原 - 藻酸盐基质的3-D系统，以解剖结核病中宿主病原体的相互作用。
【背景】结核分枝杆菌（Mtb）是全球公共卫生重要性的病原体，每年造成180万人死亡，全球发病率达到1000万（世卫组织，2016年）。尽管在研究方面进行了大量投资，但需要更多地了解宿主 - 病原体的相互作用才能改善预防和治疗。目前，病原菌对常用药物的耐药性越来越高，出现广泛耐药Mtb。结核病（TB）领域的挑战之一是可用于询问宿主 - 病原体相互作用的模型系统，因为广泛使用的动物模型不能完全反映人类的病理学。因此，迫切需要通过开发与生理相关的体外环境（Bielecka等人，2017年; Tezera等人）来补充这些动物模型。，2017）。 ...
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| Genome-Wide siRNA Screen for Anti-Cancer Drug Resistance in Adherent Cell Lines
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Author:
Date:
2015-05-20
[Abstract] The expression of genes is frequently manipulated in cell lines to study their cellular functions. The use of exogenous small Interfering RNAs (siRNAs) is a very efficient technique to temporarily downregulate the expression of genes of interest [reviewed by Hannon and Rossi (2004)]. A genome-wide siRNA library allows the user to study both the effect of each individual gene on a particular cell phenotype in a high throughput manner and also assess its phenotypic effect relative to all other genes targeted. Several factors that potentially influence the outcome of a screen need to be considered when performing a large siRNA screen (Jiang et al., 2011). Here we present a detailed protocol for a genome-wide screen to identify genes involved in anti-cancer drug resistance using the ...
[摘要] 基因的表达经常在细胞系中操作以研究它们的细胞功能。外源小干扰RNA（siRNA）的使用是临时下调感兴趣的基因的表达的非常有效的技术[由Hannon和Rossi（2004）综述]。全基因组siRNA文库允许用户以高通量方式研究每个个体基因对特定细胞表型的作用，并且还评估其相对于所有其他靶向基因的表型效应。当进行大siRNA筛选时，需要考虑潜在地影响筛选结果的几个因素（Jiang等人，2011）。在这里，我们提出了一个详细的协议，使用人类siGENOME库从Dharmacon的基因组范围屏幕识别参与抗癌耐药性的基因。在该方案中，我们关注对表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKI）厄洛替尼在对EGFR-TKIs敏感的肺癌细胞系PC9中的治疗的抗性（de Bruin等。，2014）。该方案可用于其他细胞系和其他药物治疗，我们在下面的注释中扩展。
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