| In vivo and in vitro 31P-NMR Study of the Phosphate Transport and Polyphosphate Metabolism in Hebeloma cylindrosporum in Response to Plant Roots Signals
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Author:
Date:
2018-08-20
[Abstract] We used in vivo and in vitro phosphorus-31 nuclear magnetic resonance (31P-NMR) spectroscopy to follow the change in transport, compartmentation and metabolism of phosphate in the ectomycorrhizal fungus Hebeloma cylindrosporum in response to root signals originating from host (Pinus pinaster) or non-host (Zea mays) plants. A device was developed for the in vivo studies allowing the circulation of a continuously oxygenated mineral solution in an NMR tube containing the mycelia. The in vitro studies were performed on fungal material after several consecutive treatment steps (freezing in liquid nitrogen; crushing with perchloric acid; elimination of perchloric acid; freeze-drying; dissolution in an appropriate liquid ...
[摘要] 我们使用体内和体外磷-31核磁共振（ 31 P-NMR）光谱来跟踪运输，分区和 外生菌根真菌 Hebeloma cylindrosporum 中的磷酸盐代谢响应来自宿主（ Pinus pinaster ）或非宿主（ Zea mays ）的根信号植物。 开发了一种用于体内研究的装置，其允许连续氧化的矿物质溶液在含有菌丝体的NMR管中循环。 在几个连续的处理步骤（在液氮中冷冻;用高氯酸压碎;消除高氯酸;冷冻干燥;在适当的液体培养基中溶解）后，对真菌材料进行体外研究。
【背景】 菌根真菌和植物之间的关联改善了宿主植物的P营养（Smith和Read，2008; Plassard和Dell，2010; Cairney，2011; Smith 等人，，2015）。这种积极效应主要归因于真菌菌丝对磷酸盐（Pi）的吸收，探测了在活跃吸收根周围的耗竭区以外的大量土壤（Smith和Read，2008; Cairney，2011; Smith et al。< em="">，2015）和真菌细胞分泌细胞外磷酸酶（Quiquampoix和Mousain，2005）。吸收的Pi部分地掺入磷酸化的代谢物，磷脂和核酸中，并且部分地浓缩成多磷酸盐（PolyP），其中它们构成液泡中的储存池（Ashford 等人，，1994）。该协议详述了一种装置，该装置允许通过 31 ...
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| Transient Gene Expression for the Characteristic Signal Sequences and the Estimation of the Localization of Target Protein in Plant Cell
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Author:
Date:
2018-02-20
[Abstract] We have proposed and tested a method for characterization of the signal sequences and determinations of target protein localization in a plant cell. This method, called the AgI-PrI, implies extraction of protoplasts from plant tissues after agroinfiltration. The suggested approach combines the advantages of two widely used methods for transient gene expression in plants–agroinfiltration and transfection of isolated protoplasts. The AgI-PrI technic can be applied to other plant species.
[摘要] 我们已经提出并测试了用于表征信号序列和确定植物细胞中目标蛋白质定位的方法。 这种称为AgI-PrI的方法意味着在农杆菌浸润后从植物组织中提取原生质体。 所提出的方法结合了两种广泛使用的用于植物中瞬时基因表达的方法的优点 - 农杆菌浸润和转分离的原生质体。 AgI-PrI技术可应用于其他植物物种。
【背景】迄今为止，已经开发并广泛使用以下用于植物中基因瞬时表达的技术：农杆菌渗入，植物外植体的生物射弹和使用聚乙二醇或电穿孔转染原生质体。这些方法的有效性已被清楚地证明。植物中瞬时表达基因的每种策略以及其益处具有其局限性和缺点，例如由于植物表皮细胞的复杂形状（农杆菌浸润）导致的重组报道蛋白在植物细胞区室中的良好成像困难，低转化效率以及专用设备和辅助材料（用于生物弹）的必要性，以及高活性原生质体产量和有效转染所需的复杂准备程序。这是开发和测试用于在植物细胞中瞬时表达基因的新方法的原因，优选通过改进实验方案并保留研究结果的生理意义。由于蛋白质在包括植物在内的活生物体中的细胞定位与它们的功能密切相关，活细胞中蛋白质的良好可视化成为评估蛋白质功能的重要工具。
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| A Method for Radioactive Labelling of Hebeloma cylindrosporum to Study Plant-fungus Interactions
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Date:
2017-10-20
[Abstract] In order to quantify P accumulation and P efflux in the ectomycorrhizal basidiomycete fungus Hebeloma cylindrosporum, we supplied 32P to mycelia previously grown in vitro in liquid medium. The culture had four main steps that are 1) growing the mycelium on complete medium with P, 2) transfer the mycelia into new culture solution with or without P, 3) adding a solution containing 32P and 4) rinsing the mycelia before incubation with or without plant. The main point is to rinse very carefully the mycelia after 32P supply in order to avoid overestimation of 32P efflux into the medium.
[摘要] 为了量化外生菌根担囊菌真菌Hebeloma cylindrosporum中的P积累和P流出，我们向以前在体外生长的菌液提供了 32 P 中。 培养物有四个主要步骤：1）在具有P的完全培养基上培养菌丝体，2）将菌丝体转移到具有或不具有P的新培养溶液中，3）加入含有32和32的溶液 ）在与或不与植物孵育之前冲洗菌丝体。 要点是在 32 P供应之后非常仔细地冲洗菌丝体，以避免过高估计P P。
【背景】众所周知，菌根真菌和植物之间的关联改善了宿主植物的P营养（由Smith和Read，2008; Plassard和Dell，2010; Cairney，2011; Smith等人，2015）。这种积极的作用主要是由于真菌细胞探索远离根部的土壤的磷酸盐（Pi）吸收，允许探索大量的土壤超过主要吸收根部周围形成的耗尽区（Smith and Read，2008; Cairney，2011; Smith ，2015）。然而，为了受益于宿主植物，吸收的Pi必须从探测土壤的真菌细胞转移到与宿主细胞紧密接触的细胞中。在外生菌根共生中，这些交流被认为发生在外生菌根内的“Hartig网”领域（Smith and Read，2008; ...
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