| Mimicking Angiogenesis in vitro: Three-dimensional Co-culture of Vascular Endothelial Cells and Perivascular Cells in Collagen Type I Gels
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Author:
Date:
2017-04-20
[Abstract] Angiogenesis defines the process of formation of new vascular structures form existing blood vessels, involved during development, repair processes like wound healing but also linked to pathological changes. During angiogenic processes, endothelial cells build a vascular network and recruit perivascular cells to form mature, stable vessels. Endothelial cells and perivascular cells secret and assemble a vascular basement membrane and interact via close cell-cell contacts. To mimic these processes in vitro we have developed a versatile three-dimensional culture system where perivascular cells (PVC) are co-cultured with human umbilical cord vascular endothelial cells (HUVEC) in a collagen type I gel. This co-culture system can be used to determine biochemical and cellular processes ...
[摘要] 血管发生定义了形成现有血管的新血管结构的形成过程，涉及发育过程中的修复过程，如伤口愈合，还与病理变化有关。 在血管生成过程中，内皮细胞建立血管网络并招募血管周围细胞以形成成熟稳定的血管。 内皮细胞和血管周围细胞秘密并组装血管基底膜，并通过细胞间接触进行相互作用。 为了体外模拟这些过程，我们开发了一种通用的三维培养系统，其中血管周围细胞（PVC）与胶原I型凝胶中的人脐带血管内皮细胞（HUVEC）共培养。 这种共培养系统可用于通过广泛的分析选项来确定新生血管生成事件期间的生物化学和细胞过程。
【背景】内皮细胞和血管周围细胞之间的协调相互作用对于根据给定组织内的局部需要形成稳定的血管网是非常重要的。多个分子组分有助于相互作用，但仍然很少了解。需要各种生长因子来吸引内皮细胞到低氧浓度的位点，并建立新的血管，然后被血管周围细胞覆盖。两种细胞类型相互作用以分泌特定的细胞外基质并稳定新形成的血管。在过去已经建立了多个测定法来分析二维基质胶底物上的血管细胞相互作用和血管样网络形成，但是这些测定在三维细胞内提供关于血管内血管周围细胞相互作用和血管基底膜形成的初始步骤的信息是有限的维度微环境。此外，缺乏适合于培养实验的良好表征的血管周围细胞。
我们以前分离出具有血管周围特征的细胞，因为它们表达周细胞特异性标记，产生和分泌细胞外基质蛋白并在体内刺激血管生成过程（Brachvogel等，2005和2007）。这些细胞用于与人脐静脉内皮细胞建立共培养系统，并研究三维微环境中两种细胞类型相互作用后新生血管发生的关键步骤（Pitzler等，2016; ...
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| Cytotoxicity Assay for Detection of Cereulide Produced by Emetic Bacillus cereus
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Author:
Date:
2013-01-20
[Abstract] The emetic subgroup of Bacillus cereus strains produces cereulide, a dodecadepsipeptide (1.2 kDa), which is the causative agent of food poisonings. Cereulide is synthesized by a nonribosomal peptide synthetase (NRPS), the Ces-NRPS (Ehling-Schulz et al., 2006). Cereulide is a cyclic and lipophilic potassium ionophor structurally related to the macrolide antibiotic valinomycin. Both substances act on mitochondria by depolarization and uncoupling of ATP synthesis, and this effect (mitochondrial swelling) is used to quantify cereulide in a HEp-2 cell based viability assay.
In this protocol, which was modified from an assay published by Finlay et al. (1999), valinomycin is used as a reference standard for ionophor–induced cytotoxicity, because purified ...
[摘要] 蜡状芽孢杆菌菌株的催吐亚组产生作为食物中毒的致病因子的十二缩酚酸肽（1.2kDa）的cereulide。谷胱甘肽通过非核糖体肽合成酶（NRPS），Ces-NRPS（Ehling-Schulz等人，2006）合成。脑苷脂是与大环内酯类抗生素缬氨霉素结构相关的环状和亲脂性钾离子体。这两种物质通过ATP合成的去极化和解偶联作用于线粒体，并且该效应（线粒体肿胀）用于在基于HEp-2细胞的活力测定中量化脑苷脂。
在该方案中，根据Finlay等人（1999）发表的试验进行了修改，缬氨霉素被用作离子体诱导的细胞毒性的参考标准，因为纯化的脑苷脂不是商业上的可用。该测定法已经用于定量来自不同B的脑梗的量。 cereus突变体（Lücking等人，2009; Frenzel等人，2012），并且估计从人类（人工）污染的食物中提取的脑苷脂水平> B。 cereus （Frenzel ，2011）。
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