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Date:
2017-07-20
[Abstract] 6-Phosphogluconate dehydrogenase (6PGDH; EC 1.1.1.44) catalyzes the third and irreversible reaction of the pentose phosphate pathway (PPP). It carries out the oxidative decarboxylation of the 6-phosphogluconate to yield ribulose-5-phosphate, carbon dioxide and NADPH. In higher plants, 6PGDH has several subcellular localizations including cytosol, chloroplast, mitochondria and peroxisomes (Corpas et al., 1998; Krepinsky et al., 2001; Mateos et al., 2009; Fernández-Fernández and Corpas, 2016; Hölscher et al., 2016). Using Arabidopsis thaliana as plant model and sweet pepper (Capsicum annuum L.) fruits as a plant with agronomical interest, this protocol illustrates how to prepare the plant extracts for the separation of the potential ...
[摘要] 6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶（6PGDH; EC 1.1.1.44）催化戊糖磷酸途径（PPP）的第三次和不可逆反应。它进行6-磷酸葡萄糖酸盐的氧化脱羧，得到核酮糖-5-磷酸，二氧化碳和NADPH。在高等植物中，6PGDH具有几种亚细胞定位，包括细胞质，叶绿体，线粒体和过氧化物酶体（Corpas et al。，1998; Krepinsky等人，2001; Mateos et al。，2009;Fernández-Fernándezand Corpas，2016;Hölscher等人，2016）。使用拟南芥作为植物模型和甜椒（Capsicum annuum L.）作为具有农业兴趣的植物的水果，该方案说明如何制备植物提取物用于分离通过在6％聚丙烯酰胺非变性凝胶上电泳可能的6PGDH同种型。因此，该方法允许检测在拟南芥幼苗中的三种6PGDH同种型和甜椒果实中的两种6PGDH同种型。
【背景】非变性凝胶电泳是一种强大的技术，可以分离天然蛋白质。 它们的移动性取决于蛋白质的大小，形状和净电荷。 在这些分析条件下，蛋白质保留了其活性，并结合特定的染色方法，可以分离潜在同种型的存在。 在超氧化物歧化酶家族的情况下，广泛应用这种方法。 然而，据我们所知，没有多少论文分析植物组织中6PGDH活性的不同同工型的存在（Corpas等人，1998; Mateos等人。 ，2009）。 ...
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2016-09-20
[Abstract] Starch biosynthesis in plants involves a network of enzymes of which adenosine-5’-diphosphoglucose (ADP-glucose) pyrophosphorylase (AGPase, E.C. 2.7.7.27), and soluble and granule bound starch synthases (SSS and GBSS, E.C. 2.4.1.21) play central roles. Here, we outline the protocol for extraction and assay of these enzymes in developing grains of wheat (Triticum aestivum L.). The principle of the assays outlined is based on a coupling enzymatic reactions where the product of the initial reaction is used as a substrate for subsequent reactions in order to generate NADPH, which can be measured easily by spectrophotometer. This protocol does not need expensive labelled chemicals and can be carried out using equipment commonly found in a biochemical laboratory. We applied this ...
[摘要] 植物中的淀粉生物合成涉及酶的网络，其中腺苷-5'-二磷酸葡萄糖（ADP-葡萄糖）焦磷酸化酶（AGPase，EC 2.7.7.27）和可溶性和颗粒结合的淀粉合酶（SSS和GBSS，EC 2.4.1.21）中心角色。在这里，我们概述了用于提取和测定这些酶在开发小麦谷粒（ Triticum aestivum L）中的方案。概述的测定法的原理基于偶联酶反应，其中初始反应的产物用作随后反应的底物，以便产生NADPH，其可以通过分光光度计容易地测量。该方案不需要昂贵的标记的化学品，并且可以使用通常在生化实验室中发现的设备进行。我们应用这个协议来研究开花后不同时间点小麦籽粒中AGPase，SSS和GBSS活性的动力学。
[背景] 淀粉是一种碳水化合物聚合物由α-1,4-连接的葡萄糖分子组成的线性葡聚糖聚合物和支链淀粉（由α-1,6-糖苷键支化的α-1,4-连接的葡萄糖分子组成的另一种葡聚糖聚合物）。腺苷-5'-二磷酸葡萄糖（ADP-葡萄糖）焦磷酸化酶（AGPase，E.C.2.7.7.27）催化淀粉合成的第一承诺步骤，将葡萄糖-1-磷酸和ATP转化为ADP-葡萄糖和无机焦磷酸（PPi）。 ADP-葡萄糖随后被可溶性淀粉合成酶（SSS）和颗粒结合的淀粉合酶（GBSS）（EC 2.4.1.21）和淀粉分支酶使用以延长和分支淀粉颗粒的葡聚糖链。 ...
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