| Extraction, Purification and Quantification of Diffusible Signal Factor Family Quorum-sensing Signal Molecules in Xanthomonas oryzae pv. oryzae
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Author:
Date:
2017-03-20
[Abstract] Bacteria use quorum-sensing (QS) systems to monitor and regulate their population density. Bacterial QS involves small molecules that act as signals for bacterial communication. Many Gram-negative bacterial pathogens use a class of widely conserved molecules, called diffusible signal factor (DSF) family QS signals. The measurement of DSF family signal molecules is essential for understanding DSF metabolic pathways, signaling networks, as well as regulatory roles. Here, we describe a method for the extraction of DSF family signal molecules from Xanthomonas oryzae pv. oryzae (Xoo) cell pellets and Xoo culture supernatant. We determined the levels of DSF family signals using ultra-performance liquid chromatographic system (UPLC) coupled with accurate mass ...
[摘要] 细菌使用群体感知（QS）系统监测和调节其人口密度。细菌QS涉及作为细菌通信信号的小分子。许多革兰氏阴性细菌病原体使用一类广泛保守的分子，称为扩散信号因子（DSF）家族QS信号。 DSF家族信号分子的测量对于了解DSF代谢途径，信号网络以及调节作用至关重要。在这里，我们描述了从Xanthomonas oryzae pv提取DSF家族信号分子的方法。 （ Xoo ）细胞沉淀和Xoo 培养上清液。我们使用超高效液相色谱系统（UPLC）与准确的质量飞行时间质谱仪（TOF-MS）联合测定DSF家族信号的水平。在UPLC / MS系统的帮助下，DSF的检测限低至1μM，大大提高了在细菌培养和反应混合物中检测DSF DSF家族信号分子的能力。
背景 黄单胞菌属 oryzae pv。米糠X ae））））））））））y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y十二碳烯酸（DSF），顺式-2-十二碳烯酸（BDSF），顺式-10-甲基-2-十二碳烯酸（IDSF）和顺式<顺式 -11-甲基十二烷-2,5-二烯酸（CDSF），以调节毒力因子产生（图1）。 DSF家族信号的生物合成，感知和周转需要Xoo 中的rpf ...
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| Heterologous Expression and Purification of Catalytic Domain of CESA1 from Arabidopsis thaliana
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Author:
Date:
2016-10-20
[Abstract] Heterologous expression of plant cellulose synthase (CESA) and its purification has remained a challenge for decades impeding detailed biophysical, biochemical and structural characterization of this key enzyme. An in-depth knowledge of structure and function of CESA proteins would enable us to better understand the hierarchical structure of the plant cell wall. Here, we report a detailed, and reproducible method of purification of catalytic domain of CESA1 from Arabidopsis thaliana that was recombinantly expressed in Escherichia coli. The method relies on a two stage purification procedure to obtain the catalytic domain in monomer and trimer forms. The biochemical and biophysical data including low resolution structures of the protein have been published (Vandavasi et ...
[摘要] 植物纤维素合酶（CESA）的异源表达及其纯化在数十年来一直是阻碍该关键酶的详细生物物理，生物化学和结构表征的挑战。对CESA蛋白的结构和功能的深入了解将使我们能够更好地理解植物细胞壁的层次结构。在这里，我们报告了在大肠杆菌中重组表达的来自拟南芥的CESA1的催化结构域的详细的和可重复的纯化方法。该方法依赖于两阶段纯化方法以获得单体和三聚体形式的催化结构域。已经公开了包括蛋白质的低分辨率结构的生物化学和生物物理数据（Vandavasi等人，2016）。目前，这种蛋白质的结晶研究正在进行中。
[Backg 圆形] 纤维素是植物细胞壁最重要的结构组分，地球最大的生物可再生材料来源，但它的植物合成机制了解很少。植物纤维素合成复合物（CSC），也称为"玫瑰花结"，因为其在电子显微镜图像中的六聚体外观，是一个大的多亚基跨膜蛋白复合物负责纤维素链的合成和它们组装成微原纤维。 ...
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