| Isolation of Highly Pure Primary Mouse Alveolar Epithelial Type II Cells by Flow Cytometric Cell Sorting
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Author:
Date:
2016-11-20
[Abstract] In this protocol, we describe the method for isolating highly pure primary alveolar epithelial type II (ATII) cells from lungs of naïve mice. The method combines negative selection for a variety of lineage markers along with positive selection for EpCAM, a pan-epithelial cell marker. This method yields 2-3 x 106 ATII cells per mouse lung. The cell preps are highly pure and viable and can be used for genomic or proteomic analyses or cultured ex vivo to understand their roles in various biological processes.
[摘要] 在这个协议，我们描述从初始小鼠的肺分离高纯度原发性肺泡上皮细胞类型（ATII）细胞的方法。该方法结合对多种谱系标志物的阴性选择以及对于Ep上皮细胞标记物EpCAM的阳性选择。该方法每小鼠肺产生2-3×10 6个ATII细胞。细胞制品是高度纯的和可行的，并且可以用于基因组或蛋白质组分析或培养离体以了解他们在各种生物过程中的作用。
[背景] 肺的内表面由上皮细胞排列，上皮细胞的类型在形态上和功能上随着肺内的位置而变化。 ATII细胞是两种类型的上皮细胞中的一种，其排列在肺泡壁上并且已经被描述为在表面活性剂合成和分泌中起关键作用。它们也是肺内第一道防线的一部分，并且涉及在肺部感染或过敏期间引发和调节免疫应答。它们还被认为在远端肺中充当具有增殖能力和损伤后修复上皮的能力的祖细胞。 ATII分离的可用方法不产生超过80-85％纯度的细胞制品，使得它们不适合于mRNA和蛋白质表达的可靠分析。本文所述的方法是对现有方法的改进，并产生具有最高纯度的小鼠原代ATII细胞制备物，因此可以可靠地用于表达分析。对于该方法的进一步讨论，我们将读者指向该协议起源的原始出版物（Sinha等人，2016）。
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| A 3D Culture System of Human Immortalized Myometrial Cells
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Author:
Date:
2016-10-20
[Abstract] Myometrium forms the middle layer of the uterus and is mainly composed of the smooth muscle cells. The cells in vitro are usually grown in a single layer (2-dimensional; 2D) format, whereas in vivo cells are structured in an extracellular matrix scaffolding that allows the cells to communicate and respond to environmental cues. We have developed human myometrium and leiomyoma 3-dimensional (3D) culture, wherein the cells retain their molecular characteristics and respond to environmental cues (Malik and Catherino, 2012; Malik et al., 2014).
[摘要] 子宫肌层形成子宫的中间层，主要由平滑肌细胞组成。细胞在体外通常生长在单层（2维; 2D）格式中，而体内细胞在细胞外基质支架中结构化，其允许细胞沟通和响应环境线索。我们已经开发了人子宫肌瘤和平滑肌瘤3维（3D）培养物，其中细胞保留其分子特征并响应环境线索（Malik和Catherino，2012; Malik等人，2014）。 br /> [背景] 在过去十年中，随着更多实验室从使用人工2D格式的细胞培养转移到3D细胞培养模型系统，观察到一定的转变，其中细胞生长在允许它们附着并获得更生理结构的基质中。该模型系统为细胞提供更自然的分化状态，并且培养的细胞在体内形成组织样环境。这是一个详细的协议为myometrium 3D细胞培养生长胶原-1矩阵，修改从Malik和Catherino（2012年）。
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| Measuring Rat Serum Osmolality by Freezing Point Osmometry
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Author:
Date:
2016-10-05
[Abstract] Blood serum or plasma osmolality is the measure of electrolyte to water balance in the body’s circulation, and is tightly regulated in physiological states in order to maintain normal levels of serum solute (Bourque, 2008). Osmolality is defined as the number of osmoles of solute per kg of water (mOsm/kg) (Dufour, 1993) and can be measured using different techniques that rely on the colligative properties of the solution. The most commonly used in lab settings are vapour pressure and freezing point osmometry, which are relatively quick and easy to perform. Freezing point osmometry is preferred because it is insensitive to volatile compounds, such as alcohol, that may be present in the solution. Measurement of serum or plasma osmolality is clinically relevant for a number of conditions and ...
[摘要] 血清或血浆渗透压是体内循环中电解质与水平衡的量度，并且在生理状态下受到严格的调节，以维持血清溶质的正常水平（Bourque，2008）。重量摩尔渗透压浓度定义为每公斤水溶质渗透摩尔数（mOsm / kg）（Dufour，1993），并且可以使用依赖于溶液的碰撞性质的不同技术来测量。实验室设置中最常用的是蒸气压和凝固点渗透压测量法，它们相对快速且易于执行。凝固点渗透压是优选的，因为它对溶解中可能存在的挥发性化合物（例如醇）不敏感。血清或血浆渗透压的测量在许多病症和疾病方面具有临床意义，包括高钠血症，糖尿病酮症酸中毒和不良抗生素综合征（Ellison，2013; Lupsa和Inzucchi，2013; Reddi，2013）。在本协议中，我们描述了使用冰点渗透压测定技术测量大鼠血清渗透压的方法，原先在我们以前在败血症中的渗透调节扰动研究中概述（Stare等，2015）。
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