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Author:
Date:
2020-08-05
[Abstract] Primary culture of mouse hippocampal neurons is a very useful in vitro model for studying neuronal development, axonal and dendritic morphology, synaptic functions, and many other neuronal features. Here we describe a step-by-step process of generating primary neurons from mouse embryonic hippocampi (E17.5/E18.5). Hippocampal neurons generated with this protocol can be plated in different tissue culture dishes according to different experimental aims and can produce a reliable source of pure and differentiated neurons in less than one week. This protocol covers all the steps necessary for the preparation, culture and characterization of the neuronal culture, including the illustration of dissection instruments, surgical procedure for embryos’ isolation, culturing conditions and ...
[摘要] [摘要] 原代培养小鼠海马神经元是一种非常有用的体外模型用于研究神经元的发育，轴突和树突的形态，突触功能，以及许多其他神经元的特征。这里我们描述了从小鼠胚胎海马（E17.5/E18.5）产生初级神经元的一步一步的过程。根据不同的实验目的，用该方法产生的海马神经元可以在不同的组织培养皿中进行培养，并能在不到一周的时间内产生一个可靠的来源。该方案涵盖了神经元培养物的制备、培养和鉴定的所有必要步骤，包括解剖器械的说明、胚胎分离的手术程序、培养条件以及培养物纯度和分化的评估。通过分析培养6天时的钙显像动力学来评估神经元的活性。
[背景] 海马体是一个非常典型的大脑结构，对重要的大脑功能如记忆、空间导航、情绪记忆和学习至关重要。从解剖学上讲，小鼠海马体有一个清晰的C形结构，很容易定位和分离。在细胞水平上，它主要由锥体细胞组成，与其他脑区相比，中间神经元和胶质细胞较少（Kaech和Banker，2006）。因此，海马体是从野生型或基因工程小鼠模型中产生高纯度原代神经元培养物的理想区域，可用于疾病建模或研究神经元功能的多个方面，如突触传递和电生理特性、对神经毒性的敏感性，分化与衰老（；；；；）。Busche，2018Koyama和Ikegaya，2018Molnar，2011Wu等人，2019Rush等人，2020年
已经制定了许多协议，通过与神经胶质喂食器共同培养神经元来产生皮层和海马神经元（Kaech和Banker，2006），描述了用水凝胶微纤维封装的星形胶质细胞的三维神经元培养系统（Kim等人，2020年），长期向培养基中补充生长因子神经元培养（Ray ...
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Date:
2016-10-05
[Abstract] Angiogenesis, the growth of new blood vessels from pre-existing vessels, is a critical process that occurs during normal development and tumor formation. Targeting tumor angiogenesis by blocking the activity of vascular endothelial growth factor (VEGF) has demonstrated some clinical benefit; nevertheless there is a great need to target additional angiogenic pathways. We have found that the human umbilical vein endothelial cell (HUVEC) fibrin bead sprouting assay (FBA) is a robust and predictive in vitro assay to evaluate the activity of angiogenesis inhibitors. Here, we describe an optimized FBA protocol for the assessment of biological inhibitors of angiogenesis and the automated quantification of key endpoints.
[摘要] 血管发生，来自预先存在的血管的新血管的生长是在正常发育和肿瘤形成期间发生的关键过程。通过阻断血管内皮生长因子（VEGF）的活性靶向肿瘤血管生成已经证明了一些临床益处;然而，非常需要靶向额外的血管生成途径。我们已经发现，人脐静脉内皮细胞（HUVEC）纤维蛋白珠发芽测定（FBA）是评估血管生成抑制剂的活性的稳健的和预测性的体外测定。在这里，我们描述了用于评估血管生成的生物抑制剂和关键终点的自动定量的优化的FBA方案。
[背景] 血管发生，新血管的生长从先前存在的血管，是在伤口愈合和正常发育期间发生的生理过程。血管生成是一个复杂和高度调节的过程，涉及内皮细胞增殖，分化，迁移，基质粘附和细胞间的信号的紧密协调。血管发生也严重参与肿瘤发展和转移。事实上，通过阻断血管内皮生长因子（VEGF）的活性靶向肿瘤血管生成已经证明了临床益处。由于肿瘤最终对VEGF靶向治疗产生抗性，因此非常需要靶向额外的血管生成途径。我们已经发现人脐静脉内皮细胞（HUVEC）纤维蛋白珠发芽测定（FBA）（Nakatsu等人，2007; Nakatsu和Hughes，2008; ...
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