| Ex vivo Ooplasmic Extract from Developing Drosophila Oocytes for Quantitative TIRF Microscopy Analysis
|
|
Author:
Date:
2017-07-05
[Abstract] Understanding the dynamic behavior and the continuously changing composition of macromolecular complexes, subcellular structures and organelles is one of areas of active research in both cell and developmental biology, as these changes directly relate to function and subsequently to the development and homeostasis of the organism. Here, we demonstrate the use of the developing Drosophila oocyte to study dynamics of messenger ribonucleoprotein complexes (mRNPs) with high spatiotemporal resolution. The combination of Drosophila genetics with total internal reflection (TIRF) microscopy, image processing and data analysis gives insight into mRNP motility and composition dynamics with unprecedented precision.
[摘要] 了解大分子复合物，亚细胞结构和细胞器的动态行为和不断变化的组成是细胞和发育生物学中积极研究的领域之一，因为这些变化与功能和随后的生物体的发育和稳态直接相关。 在这里，我们演示了使用发展中的果蝇卵母细胞来研究具有高时空分辨率的信使核糖核蛋白复合物（mRNPs）的动力学。 果蝇的遗传学与全内反射（TIRF）显微镜，图像处理和数据分析结合，以前所未有的精确度了解了mRNP的运动性和组成动力学。
【背景】细胞内运输是活细胞的基本过程之一。几乎细胞内的所有细胞 - 离子，分子，复合物，细胞器 - 被积极地传输，使局部熵减少。尽管近年来，我们对这些运输过程的机理有了很大的了解，但我们的大部分知识来自于体外和细胞培养研究。在这些简化的系统中，很难确定是否利用运输监管流程的全部潜力。另一方面，组织，器官，组织和生物体通常太复杂，无法有效地研究时空分辨率，足以匹配这些运输过程的规模。为了结合自下而上和自上而下的方法的优点，已经开发了在保持复杂性的同时，使这些过程更易于访问的技术。一个例子是从ambiphian（例如，非洲爪蟾）卵母细胞和胚胎中制备大量细胞质提取物来研究细胞分裂（Lohka和Masui，1983; Murray，1991; Sawin和Mitchison，1991）。我们最近显示，在细胞质液滴 - ...
|
|
|
| Behavioral and Functional Assays for Investigating Mechanisms of Noxious Cold Detection and Multimodal Sensory Processing in Drosophila Larvae
|
|
Author:
Date:
2017-07-05
[Abstract] To investigate cellular, molecular and behavioral mechanisms of noxious cold detection, we developed cold plate behavioral assays and quantitative means for evaluating the predominant noxious cold-evoked contraction behavior. To characterize neural activity in response to noxious cold, we implemented a GCaMP6-based calcium imaging assay enabling in vivo studies of intracellular calcium dynamics in intact Drosophila larvae. We identified Drosophila class III multidendritic (md) sensory neurons as multimodal sensors of innocuous mechanical and noxious cold stimuli and to dissect the mechanistic bases of multimodal sensory processing we developed two independent functional assays. First, we developed an optogenetic dose response assay to assess whether levels of ...
[摘要] 为了研究有害感冒检测的细胞，分子和行为机制，我们开发了冷板行为测定和评估主要有害冷诱发收缩行为的定量方法。为了表征响应于有害感冒的神经活动，我们实施了基于GCaMP6的钙成像测定，其能够在完整的果蝇幼虫中进行体内细胞内钙动力学研究。我们将果蝇III型多发感染（md）感觉神经元识别为无机械和有害冷刺激的多模态传感器，并解剖多模态感觉加工的机理基础，我们开发了两项独立的功能测定。首先，我们开发了一种光遗传剂量反应测定法，以评估神经激活水平是否有助于感觉感觉神经元的多模态方面。其次，我们利用CaMPARI，一种可开关的钙积分器，可以在高细胞内钙和光转换光的存在下，将荧光从绿色稳定转变为红色，以评估体内的神经激活水平之间的功能差异无害的机械和有害的冷刺激。这些新颖的测定能够研究在果蝇幼虫中外周感觉神经元和多峰感官处理的行为和功能作用。
【背景】感觉和适应环境线索的能力是后生动物共享的最根本的方面之一。感测潜在的有害刺激，如有毒温度，化学或机械侮辱和适当的反应对于避免可能导致人身伤害或死亡的初期损害至关重要。通常，在感测伤害感受刺激时，动物产生一组避免行为，其减轻或允许动物逃离有害刺激。阐明加工伤害性刺激的分子，细胞和行为水平机制是非常有意义的，因为鉴定和开发用于异常感觉加工的新型治疗干预的潜力可能导致神经性疼痛。在黑腹果蝇幼虫和成虫中已经阐明了对有毒化学，机械和热刺激的感觉和行为反应，然而，近来在幼虫中发现了有害的感冒检测（Im和Galko，2012; ...
|
|
|
| Olfactory Bulb (OB) Transplants
|
|
Author:
Date:
2016-09-05
[Abstract] Transplantation in mouse brain slices is a powerful tool in order to study axon targeting and migrational events during development. Taking advantage of donors and recipients belonging to different genotypes, this technique allows researchers to assess the contribution of donor and/or recipient tissue by performing various combinations and to study cell-autonomous functions or effects that are influenced by the recipient’s environment (Bastakis, et al., 2015). Here we describe the transplantation procedure on sagittal brain slices containing olfactory bulb (OB). Specifically, we have transplanted the proximal-to-the-cortex part of dorsal OB to the same region on a recipient slice. Transplanted slices can be cultured for up to 3 days before their morphology is disfigured due to ...
[摘要] 小鼠脑切片中的移植是一个强大的工具，以便研究轴突靶向和发展过程中的迁移事件。 利用属于不同基因型的供体和受体，该技术允许研究人员通过进行各种组合来评估供体和/或受体组织的贡献，并研究受受体环境影响的细胞自主功能或效应（Bastakis， em>等人，2015）。 在这里我们描述的矢状大脑切片包含嗅球（OB）的移植程序。 具体来说，我们已经将背侧OB的近端到外皮部分移植到受体切片上的相同区域。 移植的切片可以培养长达3天，之后由于3D中的生长它们的形态被破坏。 这些切片的重新切片允许更详细的免疫组织化学分析。
|
|
|