{{'Search' | translate}}
 

Fetal Bovine Serum

胎牛血清

Company: Sigma-Aldrich
Catalog#: F7524
Bio-protocol()
Company-protocol()
Other protocol()

Using xCELLigence RTCA Instrument to Measure Cell Adhesion
Author:
Date:
2017-12-20
[Abstract]  Cell adhesion to neighbouring cells and to the underlying extracellular matrix (ECM) is a fundamental requirement for the existence of multicellular organisms. As such, the formation, stability and dissociation of cell adhesions are subject to tight control in space and time and perturbations within the sophisticated adhesion machinery are associated with a variety of human pathologies. Here, we outline a simple protocol to monitor alterations in cell adhesion to the ECM, for example, following genetic manipulations or overexpression of a protein of interest or in response to drug treatment, using the xCELLigence real-time cell analysis (RTCA) system. [摘要]  细胞与相邻细胞和基础细胞外基质(ECM)的粘附是多细胞生物存在的基本要求。 因此,细胞粘附的形成,稳定和解离在时间和空间上受到严格的控制,复杂的粘附机制内的干扰与各种人类病理有关。 在这里,我们概述了一个简单的协议,以监测细胞粘附到ECM的变化,例如,在遗传操作或目标蛋白的过表达或响应药物治疗后,使用xCELLigence实时细胞分析(RTCA)系统。

【背景】负责细胞粘附到下面的ECM的主要分子是称为整联蛋白的跨膜异二聚体受体家族。整合素的激活和与ECM的结合触发向整合素胞质尾部募集大量信号传导,支架和细胞骨架蛋白。总之,这些粘附成分代表了负责调节许多重要细胞过程(包括细胞增殖,存活,迁移和分化)的复杂且高度动态的机制。与维持正常生理功能的重要角色一致,整合素介导的粘附和信号传导失调是许多人类疾病(包括出血性疾病,心血管疾病和癌症)发病的先导(Giancotti and Ruoslahti,1999;Bökeland Brown,2002; Huveneers and Danen,2009; Legate等人,2009; Bouvard等人,2013; Calderwood等人,2013; Horton等人,等,2015; Seguin等,,2015)。因此,整合素依赖性细胞 - 细胞外基质粘附的研究是一个研究热点,也是许多生物学领域广泛关注的课题。 ...

Metabolic Heavy Isotope Labeling to Study Glycerophospholipid Homeostasis of Cultured Cells
Author:
Date:
2017-05-05
[Abstract]  Glycerophospholipids consist of a glycerophosphate backbone to which are esterified two acyl chains and a polar head group. The head group (e.g., choline, ethanolamine, serine or inositol) defines the glycerophospholipid class, while the acyl chains together with the head group define the glycerophospholipid molecular species. Stable heavy isotope (e.g., deuterium)-labeled head group precursors added to the culture medium incorporate efficiently into glycerophospholipids of mammalian cells, which allows one to determine the rates of synthesis, acyl chain remodeling or turnover of the individual glycerophospholipids using mass spectrometry. This protocol describes how to study the metabolism of the major mammalian glycerophospholipids i.e., phosphatidylcholines, ... [摘要]  甘油磷脂由甘油磷酸酯骨架组成,酯基化两个酰基链和极性头基。头组(例如胆碱,乙醇胺,丝氨酸或肌醇)限定了甘油磷脂类,而酰基链与头基一起限定了甘油磷脂分子种类。添加到培养基中的稳定的重质同位素(例如,氘)标记的头基前体有效地并入哺乳动物细胞的甘油磷脂中,这允许人们确定合成速率,酰基链重塑或周转使用质谱法测定个体甘油磷脂。该方案描述了如何用这种方法研究主要哺乳动物甘油磷脂的代谢,即磷脂酰胆碱,磷脂酰乙醇胺,磷脂酰丝氨酸和磷脂酰肌醇。


背景 放射性标记的前体已广泛用于研究培养细胞中的甘油磷脂(GPL)代谢。然而,这种方法有严重的缺点。首先,研究GPL的所有分子种类的代谢是不可行的,因为不可能的事实,即没有恢复到高度复杂和耗时的方案来将各个分子种类彼此分离(Patton& em等人,1982),这显然是研究其新陈代谢所必需的。第二,所需的放射性同位素相当昂贵。第三,为了最佳标记,未标记的前体应尽可能耗尽介质。第四,可以同时向细胞中加入两种不同的前体,即使对同位素光谱之间的重叠进行准确校正是必要的对所收集的部分进行液体闪烁计数。由于这些障碍,许多研究最近引入了研究GPL代谢的替代方法(例如,Heikinheimo和Somerharju,2002; de Kroon,2007; Kainu等人2008年; Postle和Hunt,2009; ...

Physical Removal of the Midbody Remnant from Polarised Epithelial Cells Using Take-Up by Suction Pressure (TUSP)
Author:
Date:
2017-04-20
[Abstract]  In polarised epithelial cells the midbody forms at the apical cell surface during cytokinesis. Once severed, the midbody is inherited by one of the daughter cells remaining tethered to the apical plasma membrane where it participates in non-cytokinetic processes, such as primary ciliogenesis. Here, we describe a novel method to physically remove the midbody remnant from cells and assess the possible effects caused by its loss (Bernabé-Rubio et al., 2016). [摘要]  在极化上皮细胞中,胞质在细胞分裂过程中在顶端细胞表面形成。 一旦切断,中间体被遗留于其中参与非细胞运动过程(例如初级细胞发生)的顶端质膜的其中一个子细胞遗传。 在这里,我们描述了一种从细胞中物理去除中间体残留物并评估其损失所引起的可能影响的新方法(Bernabé-Rubio et al。,2016)。
【背景】中间体或Flemming体是在有丝分裂的最后阶段在子细胞之间形成的细胞间桥的中心部分。通过运输(ESCRT)机器所需的内体分选复合体,桥梁两侧的脱落导致两个子细胞的物理分离(Green等,2012)。除了其在有丝分裂调节中的已知功能外,最近的研究已经开始阐明中间体后有丝分裂后的作用。由于其在肾细胞中腔内形成的启动中的作用,中间体被假定为极性提示(Li等,2014)。最近,已经证明,中间体残留物通过极化的Madin-Darby犬肾(MDCK)细胞(Bernabé-Rubio等,2016)直接参与初级细胞发生。还发现在秀丽隐杆线虫(Singh and Pohl,2014)的发展过程中以及在确定细胞命运和分化过程中,形成背轴的作用(Kuo et al。,2011)。以前的研究使用激光消融来损害中间体残留的功能。然而,当在培养的细胞系中进行时,由于质膜和近端胞质元件的损伤,激光烧蚀可导致细胞死亡。因此,我们设计了一个温和的程序,我们称之为“抽吸压力”(TUSP)。 ...

Comments