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Date:
2016-09-05
[Abstract] This protocol describes the expression, purification and crystallization of a ternary protein-protein-RNA complex, consisting of the two RNA recognition motifs (RRMs) of Sex-lethal (Sxl), the first of five cold shock domains of Upstream-of-N-Ras (Unr), and an 18-nucleotide region of msl2 mRNA, called the F fragment (Hennig et al., 2014).The biological role of the complex is the translational repression of msl2 mRNA, preventing the formation of the dosage compensation complex and subsequent 2-fold hypertranscription of X-linked genes in Drosophila females. As orthologous RRM-containing proteins and Unr exist in humans, similar complexes potentially also form during translational repression in vertebrates. The protocol describes the in vitro ...
[摘要] 该协议描述了三元蛋白质 - 蛋白质-RNA复合物的表达，纯化和结晶，其由性致死（Sx1）的两个RNA识别基序（RRM）组成，其是N上游的五个冷休克结构域中的第一个-Ras（Unr）和msl2 mRNA的18个核苷酸的区域，称为F片段（Hennig等人，2014）。复合物的生物学作用是msl2 mRNA的翻译抑制，阻止剂量补偿复合物的形成和随后在果蝇雌性中X连锁基因的2倍超高转录。由于直向同源的含RRM的蛋白质和Unr存在于人类中，类似的复合物也可能在脊椎动物的翻译抑制期间形成。该方案描述了复合物的体外组装及其纯化，随后是用于X射线晶体学结构测定的结晶。协议的一部分已经在别处公开（Hennig等人，2013和2014），但是在此更详细地描述一些部分。
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