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BDTM BactoTM Brain Heart Infusion (BHI)

脑心输液

Company: BD
Catalog#: 237500
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Targeted Genome Editing of Virulent Phages Using CRISPR-Cas9
Author:
Date:
2018-01-05
[Abstract]  This protocol describes a straightforward method to generate specific mutations in the genome of strictly lytic phages. Briefly, a targeting CRISPR-Cas9 system and a repair template suited for homologous recombination are provided inside a bacterial host, here the Gram-positive model Lactococcus lactis MG1363. The CRISPR-Cas9 system is programmed to cleave a specific region present on the genome of the invading phage, but absent from the recombination template. The system either triggers the recombination event or exerts the selective pressure required to isolate recombinant phages. With this methodology, we generated multiple gene knockouts, a point mutation and an insertion in the genome of the virulent lactococcal phage p2. Considering the broad host range of the plasmids used ... [摘要]  该协议描述了一个直接的方法来产生严格裂解噬菌体的基因组中的特定突变。 简而言之,在细菌宿主(此处为革兰氏阳性模型乳酸乳球菌MG1363)内提供靶向CRISPR-Cas9系统和适合于同源重组的修复模板。 CRISPR-Cas9系统被编程为切割入侵噬菌体的基因组上存在的特定区域,但是缺少重组模板。 该系统触发重组事件或施加分离重组噬菌体所需的选择性压力。 利用这种方法,我们在毒性乳酸球菌噬菌体p2的基因组中产生了多个基因敲除,点突变和插入。 考虑到本协议中使用的质粒的广泛宿主范围,后者可以外推到其他噬菌体 - 宿主对。

【背景】噬菌体是在每个生态系统中发现丰富的细菌病毒(Suttle,2005; Breitbart and Rohwer,2005),毫不奇怪,它们是牛奶的天然居民。噬菌体p2是乳品工业中发现的强毒乳球菌噬菌体的最普遍组( Sk1virus )的模型(Deveau等人,2006; Mahony等人。,2012),它感染革兰氏阳性细菌乳酸乳球菌MG1363,也是基础研究的模式菌株。尽管p2作为参照噬菌体的地位,但几乎一半的基因编码未表征的蛋白质。同样,由宏基因组学确定的绝大多数噬菌体基因在公共数据库中没有功能分配和同系物(Hurwitz等人,2016; Paez-Espino等人, 2016)。

研究基因的方法之一是通过修饰和随后观察所得到的表型。噬菌体基因组只能在宿主内以其生物活性形式进行修饰。强毒噬菌体严格裂解;因此,它们的基因组从未整合到细菌染色体中。这为DNA的体内修饰增加了一个时间限制,只能在短的感染周期内对其进行操作。 ...

In vitro Antigen-presentation Assay for Self- and Microbial-derived Antigens
Author:
Date:
2017-06-05
[Abstract]  Antigen presenting cells (APC) are able to process and present to T cells antigens from different origins. This mechanism is highly regulated, in particular by Patter Recognition Receptor (PRR) signals. Here, I detail a protocol designed to assess in vitro the capacity of APC to present antigens derived from bacteria, apoptotic and infected apoptotic cells. [摘要]  抗原呈递细胞(APC)能够处理和呈递来自不同来源的T细胞抗原。这种机制是高度调节的,特别是通过Patter Recognition Receptor(PRR)信号。在这里,我详细说明了一种设计用于评估体外的APC方案,用于展示来源于细菌,凋亡和感染的凋亡细胞的抗原。

背景 T细胞淋巴细胞在其表面上表达T细胞受体(TCR),其允许识别作为与主要组织相容性复合物(MHC)分子结合的抗原加工和呈递的抗原的细胞(自身)或微生物(非自身)抗原)呈递细胞(APC)。 APC能够处理抗原并将其呈递给T细胞,并且MHC-TCR相互作用是感染和自身免疫应答期间T细胞活化的关键步骤。
 以前的作品已经描述了基于刺激模式识别受体(PRR),例如toll样受体(TLR)(Blander和Medzhitov,2004和2006)的抗原呈递的调节机制。实际上,特异性地来自含有微生物病原体的吞噬体的TLR信号有利于在MHC-II分子内呈递非自身抗原。另一方面,凋亡细胞吞噬后产生的自身抗原由于不存在TLR刺激而导致溶酶体降解。然而,当两者都来自感染的凋亡细胞并且同时由相同的吞噬体携带时,自身和非自身抗原的分离不会发生,其由针对抗原呈递的TLR信号最佳地定制。已经使用骨髓来源的树突状细胞(BMDC)和凋亡性小鼠B细胞 - ...

Ex vivo Model of Human Aortic Valve Bacterial Colonization
Author:
Date:
2017-06-05
[Abstract]  The interaction of pathogens with host tissues is a key step towards successful colonization and establishment of an infection. During bacteremia, pathogens can virtually reach all organs in the human body (e.g., heart, kidney, spleen) but host immunity, blood flow and tissue integrity generally prevents bacterial colonization. Yet, patients with cardiac conditions (e.g., congenital heart disease, atherosclerosis, calcific aortic stenosis, prosthetic valve recipients) are at a higher risk of bacterial infection. This protocol was adapted from an established ex vivo porcine heart adhesion model and takes advantage of the availability of heart tissues obtained from patients that underwent aortic valve replacement surgery. In this protocol, fresh tissues are used ... [摘要]  病原体与宿主组织的相互作用是成功定居和建立感染的关键步骤。在菌血症期间,病原体几乎可以达到人体内的所有器官(例如心脏,肾脏,脾脏),但是宿主的免疫力,血流和组织完整性通常防止细菌定植。然而,患有心脏病(例如先天性心脏病,动脉粥样硬化,钙化性主动脉狭窄,人工瓣膜受体)的患者处于较高的细菌感染风险。该方案从已建立的远端猪心脏粘连模型改编而成,并且利用从经历主动脉瓣置换手术的患者获得的心脏组织的可用性。在该方案中,使用新鲜组织来评估与心血管感染相关的细菌病原体(例如变形链球菌)与人主动脉瓣组织的直接相互作用。

背景 口腔病原体变形链球菌被认为是龋齿中的主要病原体,也可以与感染性心内膜炎(IE)等口腔外感染有关(Banas,2004)。 ...

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