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BHK-21 [C-13]

BHK-21 [C-13]

Company: ATCC
Catalog#: CCL-10
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Alphavirus Purification Using Low-speed Spin Centrifugation
Author:
Date:
2018-03-20
[Abstract]  Chemical and sedimentation procedures are used to purify virus particles. While these approaches are successful for wild-type viruses, they are often not feasible for purifying mutant viruses with assembly defects. We combined two published methods (Atasheva et al., 2013; Moller-Tank et al., 2013), to generate a protocol that uses low-speed centrifugation to purify both wildtype and mutant enveloped virus particles at high yield with minimal handling steps. This protocol has successfully been used to purify alphavirus particles for imaging and structural studies (Wang et al., 2015; Ramsey et al., 2017). [摘要]  化学和沉淀过程用于纯化病毒颗粒。 虽然这些方法对于野生型病毒是成功的,但它们通常不能用于纯化具有装配缺陷的突变病毒。 我们结合了两种公开的方法(Atasheva等人,2013; Moller-Tank等人,2013),以生成使用低速离心纯化两种方法的方案 野生型和突变体包膜病毒颗粒,产量高,处理步骤最少。 该方案已成功用于纯化甲病毒颗粒用于成像和结构研究(Wang等人,2015; Ramsey等人,2017)。

【背景】传统上,病毒纯化基于化学沉淀(例如PEG)或密度梯度离心。离心方案包括以高速(>100,000μgx g)或通过沉淀基质如铯,Nycodenz,碘克沙醇,蔗糖,甘油或酒石酸丸粒化颗粒。在梯度沉降之后,纯化的病毒样品通常需要额外的步骤来除去梯度基质,浓缩纯化的颗粒,并且缓冲液交换成用于下游应用的稳定缓冲液。这些方法包括透析,通过离心过滤器离心或PEG沉淀。虽然这些方法会产生纯化的颗粒,但有几个缺点:(1)总产量可能很低,(2)纯化所需的时间可能延长到一周,(3)形态上不均匀的颗粒不能以相同的效率纯化,( 4)过程中可能会损坏颗粒,以及(5)组装突变体常常不能在净化过程中存活,使得某些下游分析具有挑战性。

这里描述的协议使用温和的方法来净化包膜病毒颗粒。我们使用最小的离心力来减少对粒子的损伤,这是由于负染透射电子显微镜(TEM)中增加的形态异质性或通过TEM或传染性测定法测定的易碎粒子的全部损失而观察到的。另外,我们希望减少纯化后纯化病毒体的操作。通过合并文献中的两个方案(Atasheva等人,2013; ...

Infection of Caenorhabditis elegans with Vesicular Stomatitis Virus via Microinjection
Author:
Date:
2017-11-20
[Abstract]  Over the past 15 years, the free-living nematode, Caenorhabditis elegans has become an important model system for exploring eukaryotic innate immunity to bacterial and fungal pathogens. More recently, infection models using either natural or non-natural nematode viruses have also been established in C. elegans. These models offer new opportunities to use the nematode to understand eukaryotic antiviral defense mechanisms. Here we report protocols for the infection of C. elegans with a non-natural viral pathogen, vesicular stomatitis virus (VSV) through microinjection. We also describe how recombinant VSV strains encoding fluorescent or luciferase reporter genes can be used in conjunction with simple fluorescence-, survival-, and luminescence-based assays to ... [摘要]  在过去的15年中,线虫自由生活已经成为探索真核细菌和真菌病原体真核免疫的重要模型系统。 最近,使用天然或非天然线虫病毒的感染模型也已经在C中建立。线虫。 这些模型提供了使用线虫了解真核抗病毒防御机制的新机会。 在这里,我们报告感染的协议。 线虫与非天然病毒病原体,水泡性口炎病毒(VSV)通过显微注射。 我们还描述了编码荧光或萤光素酶报告基因的重组VSV毒株如何与简单的基于荧光,存活和发光的分析结合使用来鉴定宿主遗传背景,并对病毒感染有不同的易感性。

【背景】由于它的遗传易用性,体积小,文化价廉,透明的身体,自由生活的线虫秀丽隐杆线虫作为模式生物提供了许多优点。此外,C的易感性。线虫对人类多种细菌和真菌病原体的作用使得这种蠕虫成为研究微生物发病机制的有吸引力的系统(Zhang和Hou,2013; Cohen and Troemel,2015)。最近,发现了正义ssRNA奥赛病毒(OV)作为第一种天然的病毒病原体。线虫已经提示使用OV- C。 elegans 模型来定义线虫抗病毒防御机制(Felix等人,2011; Gammon,2017)。这些研究已经证明了线虫抗病毒RNA干扰途径组分如Dicer相关解旋酶1(DRH-1)在限制病毒复制中的明确作用(Ashe等人,2013)。

为了补充OV模型系统,我们最近报道了新一代病毒的产生。使用反义ssRNA水泡性口炎病毒(VSV)(Gammon等人,2017)的线虫模型。用VSV感染野生型(N2)蠕虫是致命的,虽然抗病毒反应(例如突变体,drh-1突变体)突变体缺陷会更快地感染感染(Gammon ...

Mouse Model of Dengue Virus Infection with Serotypes 1 and 2 Clinical Isolates
Author:
Date:
2016-12-05
[Abstract]  Dengue is a global public health threat caused by infection with any of the 4 related dengue virus serotypes (DENV1-4). Clinical manifestations range from self-limiting febrile illness, known as dengue fever (DF), to life-threatening severe diseases, such as dengue hemorrhagic fever (DHF) or dengue shock syndrome (DSS). Most cases of DHF/DSS are associated with secondary heterotypic infections through a phenomenon that is described as antibody-dependent enhancement of infection (ADE). There are an estimated 400 million human infections and several hundred thousand cases of severe dengue occurring yearly. At present, however, there are no approved antiviral drugs against DENV infection. The lack of a suitable animal model has hampered the evaluation of novel antiviral candidates for DENV ... [摘要]  登革热是由4种相关登革热病毒血清型(DENV1-4)的任一种感染引起的全球公共卫生威胁。临床表现的范围从自限性发热疾病,称为登革热(DF),到危及生命的严重疾病,如登革热出血热(DHF)或登革热休克综合征(DSS)。大多数DHF/DSS病例通过描述为抗体依赖性增强感染(ADE)的现象与继发性异型感染相关。估计每年有4亿人感染和数十万例严重登革热病例。然而,目前,还没有批准的抗DENV感染的抗病毒药物。缺乏合适的动物模型阻碍了DENV感染的新抗病毒候选物的评价。由于DENV在免疫活性小鼠中不良地建立感染,已将AG129小鼠(缺乏I型和II型IFN [干扰素]受体)和小鼠适应的DENV2株应用于能够繁殖人类感染的几种主要病理的登革动物模型。最近,我们开发了具有临床分离株DENV1和DENV2的新的小鼠模型,其将用于药物测试和登革热发病机理研究(Watanabe等人,2016)。在这里我们描述建立临床分离株的登革热小鼠模型的细节;从体外材料制备到体内病毒感染。值得注意的是,由于DENV在小鼠中的感染性在病毒株之间不同,不是所有临床分离株都可以诱导严重的登革热。
关键字:登革热病毒,致命的小鼠模型,临床病毒,病毒感染的抗体依赖性增强,药物测试

[背景] 为了克服DENV在啮齿动物细胞中不能很好复制的缺点,多年来已经进行了许多努力来开发模拟人类登革热感染的小动物模型。近交小鼠模型系统允许实验可变性最小化,并且遗传工程小鼠模型能够再现动物中登革热临床症状的一些方面。过去的研究显示,用DENV2临床分离物感染的AG129小鼠(缺乏I型和II型IFN受体)感染瘫痪的迹象,这是中枢神经系统受累的病症,在人类病例中是罕见的(Shresta等人。,2004)。或者,产生可在AG129小鼠中诱导人类DHF/DSS样疾病的小鼠适应的DENV2毒株,并已用于登革热研究(Shresta等人,2006; ...

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