| Preparation of Primary Cultures of Embryonic Rat Hippocampal and Cerebrocortical Neurons
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Author:
Date:
2017-09-20
[Abstract] This protocol aims at standardizing the procedure to obtain primary cultures of hippocampal and cerebrocortical neurons for in vitro experiments. Cultures should be prepared from cells isolated during embryonic development when neuronal precursor cells are not yet fully differentiated. This helps increasing the quality and quantity of cells, while offering minimal cell death that often occurs during dissociation of differentiated neurons. Cells plated under the appropriate conditions, either in Petri-dishes or in multi-well plates, will develop and establish synaptic contacts over time since the neuronal culture medium provides the nutrients and trophic factors required for differentiation. In this protocol we describe the methodology for the preparation of both cortical and ...
[摘要] 该方案旨在标准化海马和脑皮质神经元原代培养物的体外实验。 培养物应从胚胎发育期间分离的细胞制备，当神经元前体细胞尚未完全分化时。 这有助于提高细胞的质量和数量，同时提供通常在分化的神经元解离期间发生的最小的细胞死亡。 在合适的条件下，在培养皿或多孔板中铺板的细胞将随着时间的推移而发展和建立突触接触，因为神经元培养基提供分化所需的营养和营养因子。 在这个协议中，我们描述了制备皮质和海马神经元培养物的方法。
【背景】本方案描述了使用补充有NeuroCultTM SM1的Neurobasal培养基（Chen等人，2008）的大鼠海马和脑皮层神经元的原代培养物的制备。 NeuroCultTM SM1的组成基于B27补充剂的制剂（Brewer等，1993），但是前者的混合物被发现提高了神经元培养的质量，部分地通过用全转运蛋白替代载脂蛋白转运蛋白 Chen et al。，2008）。 此外，NeuroCultTM SM1的化学成分在原始出版物中有更详细的描述，可以更好地控制实验条件。 用化学确定的培养基制备的神经元培养物的特征在于存在低百分比的星形胶质细胞。 通过添加有丝分裂5-氟-2'-脱氧尿苷的化学抑制剂可以防止维持更长时间的培养物中星形胶质细胞的增殖以允许神经元分化。
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| Transient Transfection-based Fusion Assay for Viral Proteins
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Author:
Date:
2017-03-05
[Abstract] Membrane fusion is vital for entry of enveloped viruses into host cells as well as for direct viral cell-to-cell spread. To understand the fusion mechanism in more detail, we use an infection free system whereby fusion can be induced by a minimal set of the alphaherpesvirus pseudorabies virus (PrV) glycoproteins gB, gH and gL. Here, we describe an optimized protocol of a transient transfection based fusion assay to quantify cell-cell fusion induced by the PrV glycoproteins.
[摘要] 膜融合对于将包膜病毒进入宿主细胞以及直接病毒细胞到细胞传播至关重要。为了更好地了解融合机制，我们使用无感染系统，可以通过最小的α疱疹病毒伪狂犬病病毒（PrV）糖蛋白gB，gH和gL诱导融合。在这里，我们描述了基于瞬时转染的融合测定的优化方案，以定量由PrV糖蛋白诱导的细胞 - 细胞融合。
背景 膜融合对于包膜病毒的进入和扩散至关重要。许多包膜病毒只需要一种或两种病毒蛋白来介导宿主细胞的附着和膜融合，分子机制也被很好地理解（Harrison，2015）。相比之下，疱疹病毒使用需要受体结合蛋白的更复杂的机制和由gB和异二聚体gH / gL复合物组成的核心融合机构用于感染性进入。导致疱疹病毒包膜与细胞膜融合的机制尚不完全清楚。疱疹病毒进入和传播的分子基础的详细知识对于针对各种疾病的有效对策是重要的。通过研究瞬时表达相关蛋白质的细胞的细胞融合活性来帮助更好的理解。已经开发了不同的模型系统，其中在不存在感染的情况下，开发了由糖蛋白gB和gH / gL和受体结合gD表示的最小的核心融合机制的融合，例如，对于1型单纯疱疹病毒和2（HSV-1和2 [Turner等人，1998; Muggeridge，2000; ...
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| Protocol for Primary Microglial Culture Preparation
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Author:
Date:
2016-11-05
[Abstract] Primary microglia, in either mono-culture or co-culture with neurons or astrocytes, are a powerful tool for studying mechanisms underlying microglial inflammatory responses and cell type-specific interactions in the central nervous system (CNS). This protocol provides the details of how to prepare high purity primary microglia from newborn mouse pups. The overall steps include brain cell dissociation, mixed glial cell culture, and microglia isolation.
[摘要] 单细胞培养或与神经元或星形胶质细胞共培养的原代小胶质细胞是研究中枢神经系统（CNS）中小胶质细胞炎症反应和细胞类型特异性相互作用的机制的有力工具。 该方案提供了如何从新生小鼠幼崽准备高纯度小胶质细胞的细节。 总体步骤包括脑细胞解离，混合胶质细胞培养和小胶质细胞分离。
【背景】近年来，神经炎症已成为神经科学研究的热点领域。在各种神经系统疾病患者的脑中观察到炎症反应，如胶质细胞激活和细胞因子上调（Fan等，2015; Koshimori等，2015; Garden and Campbell，2016）。神经炎症不仅被认为是脑内病理变化的结果，而且也是疾病进展的贡献者（Schwartz等，2013）。此外，炎症途径的生理功能，其重要性以前被低估，正在被揭示为令人惊讶的多才多艺。例如，补体信号通路的激活通常在神经系统疾病中的中枢神经系统（CNS）中被观察到，并被怀疑参与疾病病理生理学（Michailidou等人，2015; Loeffler等人，2008）。现在我们知道它也在突触细化发育调控中发挥重要作用（Stevens et ...
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