| Transient Expression Assay in NahG Arabidopsis Plants Using Agrobacterium tumefaciens
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Author:
Date:
2018-06-20
[Abstract] Agrobacterium-mediated transient expression has greatly contributed to research in molecular plant biology but has low efficiency and inconsistency in Arabidopsis thaliana (Arabidopsis). Here, we describe a simple, efficient and fast protocol to make transient gene expression in NahG Arabidopsis plants using Agrobacterium tumefaciens. This protocol has been successfully used to assess protein sub-cellular localization and accumulation, enzyme activity, and protein-protein interaction. In addition, this assay overcomes the use of Nicotiana benthamiana plants as a surrogate system for transient gene expression assays. Finally, the use of this protocol does not require complex inoculation methods or specific growth conditions, and can be ...
[摘要] 农杆菌介导的瞬时表达大大促进了分子植物生物学的研究，但是在拟南芥（Arabidopsis thaliana）（ Arabidopsis ）中效率低且不一致。 在这里，我们描述了一种简单，高效和快速的方法，用于根据根癌农杆菌在 NahG 拟南芥植物中进行瞬时基因表达。 该方案已成功用于评估蛋白质亚细胞定位和积累，酶活性和蛋白质 - 蛋白质相互作用。 此外，该测定法克服了使用本氏烟草植物作为瞬时基因表达测定的替代系统。 最后，该方案的使用不需要复杂的接种方法或特定的生长条件，并且可以与具有相似结果的不同农杆菌菌株一起使用。
【背景】根癌土壤杆菌（以下简称土壤杆菌）介导的瞬时转化试验已经对分子植物生物学研究作出了重大贡献。这些方法与费时费力的稳定转化方法相比具有许多优点，其中包括在烟草本氏烟中进行瞬时转化测定时更高的效率，简单性和快速，一致的结果。另一方面，当在模式植物拟南芥（以下称为拟南芥）中进行这些测定时，这些测定是无效的并且缺乏稳健性，从而迫使拟南芥研究人员使用 N。本氏烟草作为一种异源系统，这会带来明显的局限性，并可能产生令人误解的结果。
过去已做出许多努力来提高土壤杆菌介导的拟南芥中的瞬时转化的功效（在Krenek等人的综述中，2015年）。 ...
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| Quantification of Chlorophyll as a Proxy for Biofilm Formation in the Cyanobacterium Synechococcus elongatus
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Author:
Date:
2017-07-20
[Abstract] A self-suppression mechanism of biofilm development in the cyanobacterium Synechococcus elongatus PCC 7942 was recently reported. These studies required quantification of biofilms formed by mutants impaired in the biofilm-inhibitory process. Here we describe in detail the use of chlorophyll measurements as a proxy for biomass accumulation in sessile and planktonic cells of biofilm-forming strains. These measurements allow quantification of the total biomass as estimated by chlorophyll level and representation of the extent of biofilm formation by depicting the relative fraction of chlorophyll in planktonic cells.
[摘要] 最近报道了蓝细菌聚球蓝细菌PCC 7942中生物膜发育的自我抑制机制。 这些研究需要定量由生物膜抑制过程中受损的突变体形成的生物膜。 在这里，我们详细描述了叶绿素测量作为生物膜形成菌株无菌和浮游细胞中生物量积累的代用途。 这些测量可以通过叶绿素水平估计的总生物量进行定量，并通过描绘浮游细胞中叶绿素的相对分数来表示生物膜形成的程度。
【背景】几个最近发表的研究表明，蓝藻中细胞聚集和生物膜发育的基础的机制的新兴兴趣（Fisher等人，2013; Jittawuttipoka等人，2013; 2014; Enomoto等人，2014; Schwarzkopf等人，2014; Enomoto等人，，2015; Oliveira等人，2015; Agostoni等人，2016; Parnasa等人，2016）。我们最近报道了一种自生物膜抑制机制，其决定了单细胞蓝细菌聚球蓝细菌PCC 7942（Schatz等人，2013; Nagar和Schwarz，2015）的浮游生长）。通过灭活特定基因来消除生物膜抑制过程导致在这种其他浮游菌株（Schatz等人，2013; ...
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| Stable Transformation of Cyanobacterium Synechocystis sp.
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Author:
Date:
2014-11-05
[Abstract] Cyanobacteria are prokaryotes, which perform oxygenic photosynthesis. Among them, the unicellular cyanobacterium Synechocystis sp. PCC 6803 (hereafter Synechocystis) is a well characterized model system for studies on oxygenic photosynthesis, light signal transduction etc. Moreover, Synechocystis is applied in biotechnological applications (Desai and Atsumi, 2013). Stable transformation of Synechocytis is achieved via the uptake of DNA and incorporation into the host genome by homologous double recombination. This allows for the generation of gene knock-outs (KO) by replacing the coding sequence of the gene of interest by a KO-cassette (comprising of a selection marker flaked by sequences of the gene of interest) or stable overexpression of ...
[摘要] 蓝细菌是原核生物，其执行含氧光合作用。其中，单细胞蓝细菌集胞藻 PCC 6803（下文称为"集胞藻"）是用于研究含氧光合作用，光信号转导等的良好表征的模型系统。此外，集胞藻应用于生物技术应用（Desai和Atsumi，2013）。通过DNA的吸收和通过同源双重重组并入宿主基因组中实现集胞藻的稳定转化。这允许通过用KO盒（包含由感兴趣的基因的序列片段化的选择标记）或感兴趣的基因的某些基因的稳定过表达来产生基因敲除（KO）在相应的过表达盒插入宿主基因组上的中性插入位点之后。稳定转化集胞藻由Grigorieva和Shestakov（1982）报道。从那时起，初始协议的变体已经成功应用于变换集胞藻。在这里，我们描述了成功应用于集胞藻的稳定转化的实验室方案（Schwarzkopf等人，2014）。
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