|
Author:
Date:
2015-06-20
[Abstract] The chick embryo has prevailed as one of the major models to study developmental biology, cell biology and regeneration. From all the anatomical features of the chick embryo, the eye is one of the most studied. In the chick embryo, the eye develops between 26 and 33 h after incubation (Stages 8-9, Hamburger and Hamilton, 1951). It originates from the posterior region of the forebrain, called the diencephalon. However, the vertebrate eye includes tissues from different origins including surface ectoderm (lens and cornea), anterior neural plate (retina, iris, ciliary body and retinal pigmented epithelium) and neural crest/head mesoderm (stroma of the iris and of the ciliary body as well as choroid, sclera and part of the cornea). After gastrulation, a single eye field originates from the ...
[摘要] 鸡胚已成为研究发育生物学，细胞生物学和再生的主要模型之一。从鸡胚的所有解剖特征，眼睛是研究最多的之一。在鸡胚中，眼睛在孵育后26和33小时之间发育（阶段8-9，Hamburger和Hamilton，1951）。它起源于前脑的后部区域，称为间脑。然而，脊椎动物眼睛包括来自不同起源的组织，包括表面外胚层（晶状体和角膜），前神经板（视网膜，虹膜，睫状体和视网膜色素上皮）和神经嵴/头中胚层（虹膜和睫状体的基质以及脉络膜，巩膜和角膜的一部分）。在预处理后，单个眼视野源自前神经板，并且其特征在于协调眼部发育程序的眼场转录因子（EFTF）的表达。在后来的发展中，眼球分成两部分和视囊泡形式。在与透镜阵列几次感应相互作用之后，形成视杯。在阶段14-15，视杯的外层变成视网膜色素上皮（RPE），而内层形成最终分化成视网膜的神经上皮。鸡胚的一个主要优点是进行实验以过表达或下调基因表达在一个地方和时间特异性方式来探索基因功能和调节的可能性。这个协议的目的是描述电穿孔技术在阶段8-12（前神经折叠和光囊泡阶段）和阶段19-26（眼杯，RPE和神经上皮）。我们提供设备，材料和电极设置的完整描述，以及高度可重现的协议的详细描述，包括一些有代表性的结果。该协议已经从我们以前的出版物Luz-Madrigal等人（2014）和Zhu等人（2014）中改编而来。
|
|
Author:
Date:
2014-10-05
[Abstract] This protocol is useful to manipulate gene expression in the embryonic retina and compare the result with the contralateral non electroporated retina. In addition, the electroporation of a membrane or cytoplasmic tagged GFP allows to determine the effects of gene manipulation on the outgrowth of retinal ganglion cell axons (Garcia-Frigola et al., 2007) or simply to follow axon outgrowth in mutant embryos. DNA can be directed to different quadrants of the retina (ventral or dorsally) by modifying the position of the electrodes (Petros et al., 2009; Sánchez-Arrones et al., 2013). After the procedure, embryos are left developing to the desired stage, including postnatal stages.
[摘要] 该方案可用于操纵胚胎视网膜中的基因表达，并将结果与对侧非电穿孔视网膜进行比较。 此外，膜或细胞质标记的GFP的电穿孔允许确定基因操作对视网膜神经节细胞轴突的生长的影响（Garcia-Frigola等人，2007）或简单地遵循突变体胚胎中的轴突生长。 通过修改电极的位置，DNA可以被引导到视网膜的不同象限（腹侧或背侧）（Petros等，2009;Sánchez-Arrones等，2013）。 手术后，胚胎发育到期望的阶段，包括产后阶段。
|