| Immunohistochemistry of Kidney a-SMA, Collagen 1, and Collagen 3, in A Novel Mouse Model of Reno-cardiac Syndrome
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Author:
Date:
2020-09-20
[Abstract] Cardiorenal syndrome defines a synergistic pathology of the heart and kidneys where failure of one organ causes failure in the other. The incidence of cardiovascular mortality caused by this syndrome, is 20 fold higher in the end stage renal disease (ESRD) population compared to the population as a whole thus necessitating the need for improved therapeutic strategies to combat reno-cardiac pathologies.
Murine in vivo models play a major role in such research permitting precise genetic modification thus reducing miscellany, however presently there is no steadfast model of reno-cardiac syndrome in the most common genetically modified mouse strain, the C57BL/6 mouse. In this study we have modified an established model of chronic renal disease using adenine diet and ...
[摘要] [摘要 ] 心肾综合征定义了心脏和肾脏的协同病理，其中一个器官的衰竭导致另一个器官的衰竭。与整个人群相比，该综合征导致的心血管疾病死亡率在终末期肾脏病（ESRD）人群中要高出20倍，因此有必要改善治疗策略以应对肾病。
小鼠体内模型在允许精确基因修饰从而减少杂项的研究中起主要作用，但是目前在最常见的基因修饰小鼠品系C57BL / 6小鼠中还没有稳定的雷诺-心脏综合征模型。在这项研究中，我们使用腺嘌呤饮食修改了已建立的慢性肾脏疾病模型，并扩展了在C57BL / 6小鼠中实现慢性肾功能衰竭和随之而来的肾心脏综合征的相关病理。
使八周大的雄性C57BL / 6小鼠适应7天，然后给予0.15％腺嘌呤饮食或对照饮食20周，此后终止实验，收集血液，尿液和器官并进行生化和免疫组织化学分析。
施用0.15％的腺嘌呤饮食会导致进行性肾功能衰竭，从而导致肾性心脏病综合征，这可通过心体重比显着增加来证实（P <0.0001）。血液生化表明，用腺嘌呤喂养的小鼠血清肌酐，尿素含量显着增加（P <0.0001），肾小球滤过率显着降低（P <0.05），而肾脏的α-SMA，胶原蛋白1和胶原蛋白3免疫组化显示严重的纤维化。
我们提出了一种新型的腺嘌呤饮食方案，该方案在C57BL / ...
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| Magnetic Resonance Imaging and Histopathological Visualization of Human Dural Lymphatic Vessels
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Author:
Date:
2018-04-20
[Abstract] In this protocol, we describe a method to visualize and map dural lymphatic vessels in-vivo using magnetic resonance imaging (MRI) and ex-vivo using histopathological techniques. While MRI protocols for routine imaging of meningeal lymphatics include contrast-enhanced T2-FLAIR and T1-weighted black-blood imaging, a more specific 3D mapping of the lymphatic system can be obtained by administering two distinct gadolinium-based MRI contrast agents on different days (gadofosveset and gadobutrol) and subsequently processing images acquired before and after administration of each type of contrast. In addition, we introduce methods for optimal immunostaining of lymphatic and blood vessel markers in human dura mater ex-vivo.
[摘要] 在该协议中，我们描述了一种使用组织病理学技术使用磁共振成像（MRI）和体外可视化和绘制硬膜淋巴管体内的方法。 虽然用于脑膜淋巴管的常规成像的MRI方案包括对比增强的T2-FLAIR和T1加权的黑血成像，但是可以通过在不同日期施用两种不同的基于钆的MRI造影剂来获得更具体的淋巴系统3D图谱 （gadofosveset和钆布醇）并且随后处理在施用每种类型的对比之前和之后采集的图像。 此外，我们介绍了在人体硬脑膜内进行淋巴和血管标志物最佳免疫染色的方法。
【背景】在大脑免疫特权的原因是没有实质淋巴管。 然而，最近的研究发现了啮齿动物硬脑膜中广泛的淋巴循环系统（Aspelund等人，2015; Louveau等人，2015），提供了可能的途径 用于消除大脑的废物和免疫细胞进入深部颈部淋巴结。 在这个协议中，我们描述了一种方法来：（1）使用MRI的头部显示硬脑膜内的淋巴管体内，和（2）使用优化评估淋巴管的局部存在 免疫染色方法（Absinta等人，2017）。 淋巴管的体内成像可以更详细地研究废物清除和免疫功能的机制及其在各种疾病和衰老中的潜在异常。
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| Bimolecular Fluorescence Complementation (BiFC) Assay for Direct Visualization of Protein-Protein Interaction in vivo
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Author:
Date:
2013-10-20
[Abstract] Bimolecular Fluorescence Complementation (BiFC) assay is a method used to directly visualize protein-protein interaction in vivo using live-cell imaging or fixed cells. This protocol described here is based on our recent paper describing the functional association of human chromatin adaptor and transcription cofactor Brd4 with p53 tumor suppressor protein (Wu et al., 2013). BiFC was first described by Hu et al. (2002) using two non-fluorescent protein fragments of enhanced yellow fluorescent protein (EYFP), which is an Aequorea victoria GFP variant protein, fused respectively to a Rel family protein and a bZIP family transcription factor to investigate interactions between these two family members in living cells. The YFP was later improved by ...
[摘要] 双分子荧光互补（BiFC）测定是用于使用活细胞成像或固定细胞直接观察蛋白质 - 蛋白质相互作用的方法。这里描述的协议是基于我们最近的论文描述人类染色质衔接子和转录辅因子Brd4与p53肿瘤抑制蛋白的功能联系（吴等人。2013年）。 BiFC首先由Hu等人（2002）使用增强的黄色荧光蛋白（EYFP）的两种非荧光蛋白片段描述，所述荧光蛋白是Aequorea victoria GFP变体蛋白，分别融合Rel家族蛋白和bZIP家族转录因子，以调查这两个家庭成员在活细胞之间的相互作用。通过引入突变以降低其对pH和氯离子的敏感性，从而产生称为金星荧光蛋白的超增强YFP，而在37℃下不显示减少的荧光，如通常用EYFP观察到的，YFP被改进（Nagai等al。，2006）。荧光信号通过两个非荧光片段（例如，金黄N末端1-158个氨基酸残基，称为Venus-N）及其C-末端159-239个氨基酸的互补而再生残基，命名为Venus-C;参见图1A和Gully等人，2012; Ding等人，2006; ...
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