| Transcytosis Assay for Transport of Glycosphingolipids across MDCK-II Cells
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Author:
Date:
2018-10-20
[Abstract] Absorption and secretion of peptide and protein cargoes across single-cell thick mucosal and endothelial barriers occurs by active endocytic and vesicular trafficking that connects one side of the epithelial or endothelial cell (the lumen) with the other (the serosa or blood). Assays that assess this pathway must robustly control for non-specific and passive solute flux through weak or damaged intercellular junctions that seal the epithelial or endothelial cells together. Here we describe an in vitro cell culture Transwell assay for transcytosis of therapeutic peptides linked covalently to various species of the glycosphingolipid GM1. We recently used this assay to develop technology that harnesses endogenous mechanism of lipid sorting across epithelial cell barriers to enable ...
[摘要] 单细胞厚粘膜和内皮屏障上的肽和蛋白质货物的吸收和分泌通过活性内吞和囊泡运输发生，其连接上皮细胞或内皮细胞（管腔）的一侧与另一侧（浆膜或血液）。 评估该途径的测定必须通过弱的或受损的细胞间连接强有力地控制非特异性和被动的溶质通量，所述细胞间连接将上皮细胞或内皮细胞密封在一起。 在这里，我们描述了一种体外>细胞培养Transwell测定法，用于与各种鞘糖脂GM1共价连接的治疗性肽的转胞吞作用。 我们最近使用该测定开发了技术，该技术利用跨上皮细胞屏障的脂质分选的内源机制，以实现肽和蛋白质治疗剂的口服递送。
【背景】
大分子穿过覆盖粘膜表面的单细胞厚的上皮屏障和衬在供给心肌和脑的血管的紧密内皮屏障上的运输通过内吞过程发生，该内吞过程将这些极化细胞的一侧与另一侧连接。该过程称为转胞吞作用（Garcia-Castillo et al。>，2017）。通过受体介导的内吞作用和穿过消化道和呼吸道粘膜的囊泡运输的免疫球蛋白的吸收和分泌最着名的是这一过程。对转胞吞作用的兴趣也受到利用该途径在紧密上皮和内皮屏障上递送治疗性肽和蛋白质的潜力的刺激（Thuenauer 等人，>，2017）。
转胞吞作用是一种活跃的（ATP驱动的）过程。在一些情况下，通过细胞间紧密连接在细胞周围被动扩散可以发生大分子跨越紧密上皮和内皮屏障的转运（Fung ...
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| Total RNA Extraction from Dinoflagellate Symbiodinium Cells
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Author:
Date:
2018-06-05
[Abstract] Dinoflagellates are unicellular algae that can have photosynthetic or nonphotosynthetic lifestyles. Dinoflagellates in the genus Symbiodinium can enter endosymbiotic associations with corals, providing the metabolic basis for the highly productive and biologically diverse coral-reef ecosystems (Hoegh-Guldberg, 1999), as well as with other cnidarians, including sea anemones and jellyfish, and non-cnidarian hosts (Trench, 1993; Lobban et al., 2002; Mordret et al., 2016).
Here, I describe a protocol for isolating total RNA from Symbiodinium cells.
[摘要] 鞭毛藻是单细胞藻类，可以有光合或非光合生活方式。 Symbiodinium属中的甲藻类可以与珊瑚进入内共生关系，为高生产力和生物多样性珊瑚礁生态系统提供代谢基础（Hoegh-Guldberg，1999），以及其他的cnidarians，包括 海葵和海蜇，以及非刺猬寄主（Trench，1993; Lobban等人，2002; Mordret等人，2016）。
在这里，我描述了从Symbiodinium细胞中分离总RNA的方案。
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| Single-cell Gene Expression Profiling of Mouse Stem Cells With Fluidigm BiomarkTM Dynamic Array
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2013-05-05
[Abstract] This protocol describes how to use Fluidigm BiomarkTM 96.96 dynamic arrays for high-throughput expression profiling from single mouse stem cells, assaying up to 96 independent samples with up to 96 quantitative PCR (qPCR) probes (equivalent to 9,216 reactions) in a single experiment. This Dynamic Array contains a network of microfluidic channels, chambers and valves that automatically assemble all these individual PCR reactions. Single-cell profiling can provide definitive evidence of stem cell heterogeneity. Modifications are most likely needed if users intend to use BiomarkTM 48.48 Dynamic array or experimenter-designed primers in conjunction with DNA-binding dyes such as EvaGreen (Biotium 31000).
[摘要] 该方案描述了如何使用Fluidigm Biomark？sup？9696动态阵列从单个小鼠干细胞进行高通量表达谱分析，使用多达96个定量PCR（qPCR）探针测定多达96个独立样品（相当于 9,216个反应）。 该动态阵列包含微流体通道，腔室和阀门的网络，其自动组装所有这些单独的PCR反应。 单细胞谱分析可以提供干细胞异质性的明确证据。 如果用户打算使用Biomark TM 48.48动态阵列或实验设计的引物与DNA结合染料如EvaGreen（Biotium 31000）结合，则很可能需要进行修饰。
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