| Sebinger Culture: A System Optimized for Morphological Maturation and Imaging of Cultured Mouse Metanephric Primordia
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Author:
Date:
2018-02-20
[Abstract] Here, we present a detailed protocol on setting up embryonic renal organ cultures using a culture method that we have optimised for anatomical maturation and imaging. Our culture method places kidney rudiments on glass in a thin film of medium, which results in very flat cultures with all tubules in the same image plane. For reasons not yet understood, this technique results in improved renal maturation compared to traditional techniques. Typically, this protocol will result in an organ formed with distinct cortical and medullary regions as well as elongated, correctly positioned loops of Henle. This article describes our method and provides detailed advice. We have published qualitative and quantitative evaluations on the performance of the technique in Sebinger et al. (2010) ...
[摘要] 在这里，我们提出了一个详细的协议，建立胚胎肾脏器官培养使用培养方法，我们已经优化解剖成熟和成像。 我们的培养方法是将肾脏的基质放在玻璃上，形成一层薄薄的培养基，培养的平面非常平坦，所有的肾小管都在同一图像平面上。 由于尚未理解的原因，与传统技术相比，该技术导致肾成熟的改善。 通常情况下，这个协议将导致器官形成不同的皮层和髓质区域，以及拉长，正确定位的亨利循环。 本文介绍了我们的方法并提供了详细的建议。 我们已经在Sebinger等人（2010）和Chang和Davies（2012）上发表了关于该技术性能的定性和定量评估。
【背景】哺乳动物的后肾（永久性）肾发育于位于中胚层尾端的简单遗传。在小鼠胚胎日（'E'）10，这些基因形成并由两种形态上可区分的组分组成;产生为Wolffian（肾）导管的憩室的上皮性输尿管芽，以及形成在导管旁的后肾间质（metanephrogenic mesenchyme）。随着发育进展，输尿管芽进入后肾间质，经历多轮生长和分枝，形成“树”。这后来重塑以产生一个成熟的集合管系统，其中肾小管从中心腔，肾盂放射（Lindstrom等人，2015）。肾盂排水到输尿管，从输尿管芽的原始茎形成。随着输尿管芽发育，它诱导来自后肾间充质细胞的细胞在其每个尖端周围凝结形成“帽间充质”（Schreiner，1902; ...
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| zPACT: Tissue Clearing and Immunohistochemistry on Juvenile Zebrafish Brain
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Author:
Date:
2017-12-05
[Abstract] In studies of brain function, it is essential to understand the underlying neuro-architecture. Very young zebrafish larvae are widely used for neuroarchitecture studies, due to their size and natural transparency. However, this model system has several limitations, due to the immaturity, high rates of development and limited behavioral repertoire of the animals used.
We describe here a modified version of the passive clearing technique (PACT) (Chung et al., 2013; Tomer et al., 2014; Yang et al., 2014; Treweek et al., 2015), which facilitates neuroanatomical studies on large specimens of aquatic species. This method was initially developed for zebrafish (Danio rerio) (Frétaud et al., 2017; Mayrhofer et al., 2017; ...
[摘要] 在脑功能研究中，了解潜在的神经结构是至关重要的。非常年轻的斑马鱼幼虫被广泛用于神经构造研究，由于它们的大小和自然透明度。然而，这个模型系统有一些局限性，由于使用的动物不成熟，发育率高，行为表现有限。
我们在这里描述了被动清除技术（PACT）的改进版本（Chung等人，2013; Tomer等人，2014; Yang等人， ，2014; Treweek et。，2015），这有助于大型水生物种标本的神经解剖学研究。这种方法最初是为斑马鱼（2017年）开发的（ Danio rerio ）（2017年;Frétaud等人，2017年; Mayrhofer等人，2017年; Xavier “）等人，2017），但也已经成功地在其他鱼类上进行了测试，如鲭鱼（Oryzias latipes ）（Dambroise et al。，2017 ），墨西哥洞穴鱼（ Astyanax mexicaus ）和非洲斑马鱼（metriaclima zebra ）以及其他水生物种，如非洲爪蟾属。 （非洲爪蟾热带非洲爪蟾）（Fini等人，2017）。该协议基于由Deisseroth实验室等开发和修改的CLARITY方法（Chung等人，2013; Tomer等人，2014; Yang等人，2014），适用于水生物种，特别是斑马鱼（zPACT）。
该协议旨在通过在聚丙烯酰胺/甲醛网状物中交联来保持组织的整体结构，使斑马鱼标本光学透明。然后通过SDS处理除去存在于样品中的大部分脂质，通过消除导致不透明的水/脂质界面处的光散射来均化样品的折射率。最后的清除步骤包括将样品在基于果糖的固定介质（衍生自SeeDB）（Ke等人，2013）中孵育，其折射率与物镜的折射率相匹配的显微镜。该技术与使用绿色荧光蛋白（GFP）在特定细胞群体中表达的转基因斑马鱼的组合提供了描述其他技术不可见的解剖细节的机会。 ...
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| Isolation and Expansion of Mesenchymal Stem Cells from Murine Adipose Tissue
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Author:
Date:
2017-08-20
[Abstract] Mesenchymal stem cells (MSCs) are currently intensively studied due to significant promise which they represent for successful implementations of future cell therapy clinical protocols. This in turn emphasizes importance of careful preclinical studies of MSC effects in various murine disease models. The appropriate cell preparations with reproducible biological properties are important to minimize variability of results of experimental cell therapies. We describe here a simple protocol for isolation of murine MSCs from adipose tissues and their reproducible multi-log expansion under hypoxia conditions.
[摘要] 间充质干细胞（MSC）目前正在深入研究，因为它们代表未来细胞治疗临床方案的成功实施的重大前景。 这又强调了对各种鼠疾病模型中MSC效应的仔细临床前研究的重要性。 具有可重现的生物学性质的合适的细胞制剂对于最小化实验细胞疗法结果的变异性是重要的。 我们在这里描述了一种用于从脂肪组织中分离鼠MSC的简单方案及其在缺氧条件下的可重复的多对数扩增。
【背景】最初由Friedenstein鉴定的MSC是成纤维细胞样形态的骨髓细胞，粘附于塑料和高自我更新能力，导致体外成纤维细胞样集落的形成（Friedenstein等，1976; Review in Phinney andSensebé ，2013）。 MSCs由于其在医学上的潜在应用，目前是研究最成熟的成体祖细胞类型之一。这些细胞可以从各种器官中分离（Murray等，2014），并且被认为是源于血管，以周细胞或血管壁细胞。除了能够沿着成骨，脂肪形成和软骨形成谱系分化的能力之外，MSC具有免疫调节特性，并且被认为参与对组织损伤的反应，以及通过其影响巨噬细胞极化的能力来组织抗炎反应（Prockop，2013; Caplan，2016）。
鉴于这些特性，MSCs代表了未来相关细胞治疗临床方案的成功实施的巨大前景。这反过来强调了在各种鼠疾病模型中使用MSC进行仔细临床前研究的重要性。制备大量具有可重复生物学特性的合适细胞样品的能力对于在开发基于MSC的实验细胞疗法期间最小化结果的变异性至关重要。然而，与具有强抗氧化防御性并因此在大气氧条件下相当好的人类MSC不同，小鼠MSC对氧应激更敏感，并且在常规CO2培养箱中培养时具有有限的寿命和扩张能力。相反，在缺氧条件下培养这些细胞，相反，显着延长了它们的寿命，并允许多对数扩增，提供足够量的具有可重复性质的细胞材料，用于用鼠实验疾病模型重复实验（Boregowda等，2012; ...
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