| Expression and Analysis of Flow-regulated Ion Channels in Xenopus Oocytes
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Author:
Date:
2017-04-20
[Abstract] Mechanically-gated ion channels play key roles in mechanotransduction, a process that translates physical forces into biological signals. Epithelial and endothelial cells are exposed to laminar shear stress (LSS), a tangential force exerted by flowing fluids against the wall of vessels and epithelia. The protocol outlined herein has been used to examine the response of ion channels expressed in Xenopus oocytes to LSS (Hoger et al., 2002; Carattino et al., 2004; Shi et al., 2006). The Xenopus oocyte is a reliable system that allows for the expression and chemical modification of ion channels and regulatory proteins (George et al., 1989; Palmer et al., 1990; Sheng et al., 2001; Carattino et al., 2003). ...
[摘要] 机械门控离子通道在机械传导中起关键作用，这是将物理力量转化为生物信号的过程。 上皮细胞和内皮细胞暴露于层流剪切应力（LSS），这是通过流体流向血管壁和上皮细胞壁所施加的切向力。 本文概述的方案已用于检查在非洲爪蟾卵母细胞中表达的离子通道对LSS的反应（Hoger等，2002; Carattino等，2004; Shi等，2006）。 非洲爪蟾卵母细胞是允许离子通道和调节蛋白的表达和化学修饰的可靠系统（George等，1989; Palmer等，1990; Sheng等，2001; Carattino等，2003）。 因此，该技术适用于研究允许流激活通道响应LSS的分子机制。
【背景】排列血管的泌尿道和内皮细胞的上皮细胞经受移动流体引起的机械力。这些力是层流剪切应力（LSS），与管状结构壁相切的摩擦力，以及垂直于流动方向的周向拉伸。令人信服的证据表明，LSS是响应肾和血管管状结构的流动变化而观察到的生理反应的主要决定因素（Satlin等，2001; Liu等，2003; Weinbaum等，2010） 。在这些设置中，离子通道具有将流体剪切应力传递到生物信号中的重要作用（Ranade等，2015）。例如，在肾的远端肾单位中，Na +再吸收和K ...
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| Isolation, Culture, and Staining of Single Myofibers
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Author:
Date:
2016-10-05
[Abstract] Adult skeletal muscle regeneration is orchestrated by a specialized population of adult stem cells called satellite cells, which are localized between the basal lamina and the plasma membrane of myofibers. The process of satellite cell-activation, proliferation, and subsequent differentiation that occurs during muscle regeneration can be recapitulated ex vivo by isolation of single myofibers from skeletal muscles and culturing them under suspension conditions. Here, we describe an improved protocol to evaluate ex vivo satellite cells activation through isolation of single myofibers from extensor digitorum longus (EDL) muscle of mice and culturing and staining of myofiber-associated satellite cells with the markers of self-renewal, proliferation, and differentiation.
[摘要] 成年骨骼肌再生由被称为卫星细胞的成人干细胞的专门群体协调，其被定位在基底层和肌纤维的质膜之间。在肌肉再生期间发生的卫星细胞激活，增殖和随后分化的过程可以通过从骨骼肌中分离单个肌纤维并在悬浮条件下培养它们而在体外重现。在这里，我们描述了一种改进的协议，通过从小鼠的伸肌腱长肌（EDL）肌肉中分离单个肌纤维来评价离体细胞的活化，并培养和染色肌纤维相关的卫星细胞的标记物自我更新，增殖和分化。
[背景] 虽然骨骼肌是一种完全分化的有丝分裂后组织，但是它保持了内在的能力，以对遗传和获得性肌肉纤维损伤的形式Grand和Rudnicki，2007）。成年人的肌肉再生由称为卫星细胞的干细胞群体介导，所述细胞位于有丝分裂静止状态的肌纤维的基底层和肌纤维膜之间（Le Grand和Rudnicki，2007）。响应于肌肉创伤，卫星细胞变得活化和增殖以产生与预先存在的纤维融合的成肌细胞，并彼此相互修复或产生新的肌纤维。一小部分卫星细胞不分化，而是重新进入静止以维持干细胞库。所有哺乳动物物种的卫星细胞表达配对盒（Pax）转录因子Pax7，其也用作确定与其他生肌因子如MyoD相关的卫星细胞命运的关键标记（Le Grand和Rudnicki，2007; et al。，2006; Kuang and Rudnicki，2008）。
可以通过肌纤维外植体的悬浮培养部分地重现关于卫星细胞活化，增殖和分化的肌肉再生的体内过程（Rosenblatt等人，1995; ...
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| Extraction and Profiling of Plant Polar Glycerol Lipids
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Author:
Date:
2016-06-20
[Abstract] This protocol describes a method to extract total polar glycerol lipids from plant materials, followed by mass spectrometry profiling. Different glycerol lipid classes can be distinguished by their head-groups, which can be profiled automatically and quantitatively by a triple quadrupole mass spectrometry in multiple reaction monitoring (MRM) mode with an autosampler. Comparing with other established methods, such as thin layer chromatography (TLC) separation followed by Gas spectrometry (GC) analysis, this method requires little effort in sample preparation and separation, while the resolution is not limited to general lipid classes but at side chain level. This method was described and used successfully to profile plant lipids changes under freezing stress in Welti et al. ...
[摘要] 该方案描述了从植物材料提取总极性甘油脂质的方法，随后是质谱分析。 不同的甘油脂类可以通过其头基来区分，其可以通过使用自动进样器的多重反应监测（MRM）模式中的三重四极杆质谱自动和定量地进行概况分析。 与其他已建立的方法，例如薄层色谱（TLC）分离，然后气体光谱（GC）分析相比，该方法在样品制备和分离中几乎不需要付出努力，而分辨率不限于一般脂质类别，而是侧链水平 。 在Welti等人（2002）中描述并且成功地使用该方法来分析在冰冻胁迫下植物脂质的变化。
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