| A Co-culture Assay to Determine Efficacy of TNF-α Suppression by Biomechanically Induced Human Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells
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Author:
Date:
2017-08-20
[Abstract] The beneficial effects of mesenchymal stem cell (MSC)-based cellular therapies are believed to be mediated primarily by the ability of MSCs to suppress inflammation associated with chronic or acute injury, infection, autoimmunity, and graft-versus-host disease. To specifically address the effects of frictional force caused by blood flow, or wall shear stress (WSS), on human MSC immunomodulatory function, we have utilized microfluidics to model WSS at the luminal wall of arteries. Anti-inflammatory potency of MSCs was subsequently quantified via measurement of TNF-α production by activated murine splenocytes in co-culture assays. The TNF-α suppression assay serves as a reproducible platform for functional assessment of MSC potency and demonstrates predictive value as a surrogate assay for ...
[摘要] 认为基于间充质干细胞（MSC）的细胞疗法的有益作用主要是由能够抑制慢性或急性损伤，感染，自身免疫和移植物抗宿主病相关炎症的能力介导的。 为了专门解决由血流或壁剪应力（WSS）引起的摩擦力对人MSC免疫调节功能的影响，我们利用微流体在动脉腔壁上建模WSS。 随后通过在共培养测定中通过活化的小鼠脾细胞测量TNF-α产生来量化MSC的抗炎效力。 TNF-α抑制测定作为MSC效力的功能评估的可重现平台，并且表现出作为MSC治疗功效的替代测定的预测价值。
【背景】间充质干细胞（MSC）的免疫调节活性由直接细胞相互作用和旁分泌因子介导（Singer和Caplan，2011;英语，2013）。 MSCs被认为是源于与骨髓和各种组织内脉管系统内皮细胞相关的周细胞（Sacchetti et al。，2007; Crisan et al。，2008）。这种独特的血管周围位置将它们置于血流中的炎症和其他可溶性因子附近，使其监测系统信号。事实上，将壁壁细胞募集到内皮是血管成熟的关键事件，周细胞在血管维持和完整性中起关键作用（Benjamin et al。，1998; ...
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| Preparation of Respiratory Syncytial Virus with High or Low Content of Defective Viral Particles and Their Purification from Viral Stocks
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Author:
Date:
2016-05-20
[Abstract] Respiratory syncytial virus (RSV) belongs to the paramyxovirus family that includes many clinically relevant viruses, such as the human metapneumovirus and measles. RSV infection can cause severe disease in infants, the elderly, and some immunocompromised adults. During RSV replication, a series of truncated forms of the viral genome is generated. These truncated viral genomes are known as defective viral genomes (DVGs) and are generated by many viruses (Lazzarini et al., 1981; Rao and Huang, 1982; Prince et al., 1996; Sun et al., 2015; Tapia et al., 2013). DVGs can restrict the replication of the full-length virus and are the primary natural triggers of the innate immune response to RSV (Sun et al., 2015; Tapia et al., 2013). ...
[摘要] 呼吸道合胞病毒（RSV）属于包括许多临床相关病毒（例如人偏肺病毒和麻疹）的副粘病毒家族。 RSV感染可以在婴儿，老年人和一些免疫受损的成人中引起严重的疾病。在RSV复制期间，产生一系列截短形式的病毒基因组。这些截短的病毒基因组被称为缺陷型病毒基因组（DVG），并且由许多病毒产生（Lazzarini等人，1981; Rao和Huang，1982; Prince等人， ，1996; Sun等人，2015; Tapia等人，2013）。 DVG可以限制全长病毒的复制，并且是针对RSV的先天免疫应答的主要天然触发因子（Sun等人，2015; Tapia等人 ，2013）。在这里，我们详细讨论如何准备具有高或低含量的DVG的RSV股票，以及如何从富含缺陷病毒颗粒的RSV原液中纯化含有DVG的缺陷病毒颗粒。这些程序可用于制备实验室研究所需的病毒原液和有缺陷的病毒颗粒。简言之，在HEp2细胞中产生不同的RSV种群，其通常用于在实验室中扩增该病毒。为了产生具有高含量DVG的RSV原液，HEp2细胞用高多重感染（MOI）多次感染，然后使用梯度离心纯化含有DVG的病毒颗粒。这里描述的方法具有四个部分：1.具有低DVG含量（RSV-LD）的种子RSV原种的扩增，2.具有高DVG含量（RSV-HD）的原种的产生，3.通过梯度离心，4.纯化DVG的表征。
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