| A Parkinson’s Disease-relevant Mitochondrial and Neuronal Morphology High-throughput Screening Assay in LUHMES Cells
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Author:
Date:
2021-01-05
[Abstract] Parkinson’s disease is a devastating neurodegenerative disorder affecting 2-3% of the population over 65 years of age. There is currently no disease-modifying treatment. One of the predominant pathological features of Parkinson’s disease is mitochondrial dysfunction, and much work has aimed to identify therapeutic compounds which can restore the disrupted mitochondrial physiology. However, modelling mitochondrial dysfunction in a disease-relevant model, suitable for screening large compound libraries for ameliorative effects, represents a considerable challenge. Primary patient derived cells, SHSY-5Y cells and in vivo models of Parkinson’s disease have been utilized extensively to study the contribution of mitochondrial dysfunction in Parkinson’s. Indeed many ...
[摘要] [摘要]帕金森氏病是一种破坏性神经退行性疾病，影响65岁以上人口的2-3％。目前尚无改善疾病的治疗方法。帕金森氏病的主要病理特征之一是线粒体功能障碍，许多工作旨在鉴定可恢复破坏的线粒体生理的治疗性化合物。然而，在疾病相关模型中对线粒体功能障碍进行建模，适用于筛选大型化合物文库的改善作用，这是一个巨大的挑战。病人原代细胞，SHSY-5Y细胞和体内 帕金森氏病模型被广泛用于研究线粒体功能障碍在帕金森氏症中的作用。确实，许多研究已经利用LUHMES细胞研究帕金森氏病，但是，尽管与其他常用模型相比，LUHMES细胞与其他常用模型相比具有多种优势，例如快速分化和高均一性，但以前并未用作PD相关的线粒体功能障碍的复合筛选模型。 （例如，与来自iPSC的神经元相反），以及与人类中脑组织相关的生理学，能够分化为高度表达特征性标记的多巴胺能样神经元。在先前产生GFP + -LUHMES细胞以模拟代谢功能障碍后，我们报道了在PD相关的线粒体功能障碍恢复模型中使用GFP + -LUHMES细胞进行高通量化合物筛选的方案。该协议描述了通过评估一系列线粒体和神经元形态学参数，使用强大且可重现的毒素诱导的GFP + -LUHMES细胞模型进行高通量化合物筛选的方法。我们还提供了有关数据和统计分析的详细说明，包括Z'得分的示例计算，以评估独立实验中的统计效应大小。
[背景]帕金森氏病（PD）是一种神经退行性疾病，其主要特征是中脑黑质中多巴胺能神经元的丢失以及神经元内包涵体中α-突触核蛋白的积累。它是第二种最常见的神经退行性疾病，影响65岁以上人口中2-3％的人口（Poewe ...
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| Quantification of Bacterial Attachment to Tissue Sections
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Author:
Date:
2018-03-05
[Abstract] Here we describe a method to test bacterial adhesion to paraffin embedded tissue sections. This method allows examining binding of different bacterial strains, transfected with a fluorescent protein reporter plasmid to various tissues, to better understand different mechanisms such as colonization. This assay provides a more physiological context to bacterial binding, than would have been achieved using adhesion assays to cell lines. The sections can be imaged using fluorescent microscopy and adhesion of various bacterial strains can be quantified and tested, simultaneously.
[摘要] 在这里我们介绍一种方法来测试石蜡包埋组织切片的细菌粘附。 该方法允许检查用荧光蛋白报道质粒转染的不同细菌菌株与各种组织的结合，以更好地理解不同的机制，例如定殖。 该测定为细菌结合提供了更多的生理学背景，比使用细胞系的粘附测定法已经实现的更多。 可以使用荧光显微镜对切片进行成像，并且可以同时量化和测试各种细菌菌株的粘附。
【背景】许多类型的细菌（共生的和致病的）表达各种粘附分子，允许它们结合到宿主的不同表面（Gur等人，2015; Abed等人 ，2016年;艾萨克森等人，2017年）。这种粘附是至关重要的，因为它是殖民化的第一步，并在不同的环境中在竞争和生存中发挥作用（Schilling et al。，2001）。这些粘附素中的许多是凝集素，在各种细胞上的糖蛋白上的结合糖部分，如上皮细胞和其他细胞（Abed等人，2016; Isaacson等人 ，2016）。多年来，许多研究宿主 - 病原体相互作用的小组使用细胞系和组织培养来试图了解细菌对细胞的粘附。组织切片为定植研究提供了更多的生理学背景，因为它们提供了使用体外组织培养几乎不可能获得的组织和结构。此外，在永生化或癌细胞中，细菌可以结合的表面分子的表达模式可能会改变。为了更好地理解细菌粘附的生理学背景，在正常和病理条件下，我们选择使用细菌附着到组织切片。
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| Dissection and Staining of Mouse Brain Ventricular Wall for the Analysis of Ependymal Cell Cilia Organization
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Date:
2016-03-20
[Abstract] In the developing and mature central nervous system (CNS) the ventricular lumen is lined by the neuroepithelium and ependymal, respectively. These ventricular epithelia perform important functions related to the development, morphogenesis and physiology of the brain. In the mature CNS, ependyma constitutes a barrier between brain parenchyma and cerebro- spinal fluid (CSF). The most prominent feature of the apical surface of ependymal cells is the presence of multiple motile cilia that extend towards the ventricular lumen. The beating of cilia ensures the circulation of the CSF and its impairment leads to hydrocephalus. For an effective CSF flow, ciliary beating must be coordinated at the level of individual cells and at the tissue level. This coordination is achieved through the precise ...
[摘要] 在发展中和成熟的中枢神经系统（CNS）中，心室腔分别由神经上皮和室管膜排列。这些心室上皮执行与脑的发育，形态发生和生理相关的重要功能。在成熟CNS中，室管膜构成脑实质和脑脊液（CSF）之间的屏障。室管膜细胞的顶面的最突出的特征是存在向心室腔延伸的多个运动性纤毛。纤毛的跳动确保CSF的循环，并且其损伤导致脑积水。对于有效的CSF流动，睫状细胞跳动必须在单个细胞水平和组织水平协调。这种协调是通过精确组织在室内平面内的纤毛定位来实现的。已经描述了关于室管膜细胞中纤毛的平面组织的两个主要特征（Mirzadeh等人，2010），并且它们都具有细胞和组织方面（Boutin等人 ，2014）。第一个，旋转极性，指睫毛跳动的方向。在细胞水平，所有纤毛在相同方向跳动（图1B，黑色箭头）。在组织水平，每个室管膜细胞协调其拍打的方向与相邻细胞的方向（图1C，灰色箭头）。第二个特征，翻译极性，对室管膜细胞是唯一的，是指簇中的纤毛聚集。在细胞水平，该簇相对于室管膜细胞的中心位移（图1B，红色箭头）。在组织水平，睫状簇的定位在相邻细胞之间协调（图1C）。在任一水平上改变任何这些极性都会损害CSF流动循环（Mirzadeh等人，2010; Boutin等人，2014; Guirao等人，/em，2010; Hirota等人，2010; ...
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