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Date:
2013-10-20
[Abstract] We use fluorescence recovery after photobleaching (FRAP) to calculate the diffusion coefficient of GFP in the nucleoplasm of fission yeast. The FRAP method can be generally used to measure the mobility of proteins inside the cell or its organelles.
In our experiment we only measured the diffusion of GFP inside the nucleoplasm of fission yeast mitotic cells. However, if GFP is fused to a protein, the mobility of the protein of interest can be calculated following the GFP signal in the bleached area. We did not, however, address this in our experiments; therefore other sources could be searched for this topic.
To compare FRAP and FLIP, both techniques can be used to measure protein mobility inside a cell. However, with FRAP, the diffusion of a protein is measured in the ...
[摘要] 我们使用光漂白后荧光恢复（FRAP）计算GFP在裂殖酵母的核质中的扩散系数。 FRAP方法通常可用于测量细胞或其细胞器内的蛋白质的移动性。
在我们的实验中，我们只测量GFP在分裂酵母有丝分裂细胞的核质内的扩散。然而，如果GFP融合到蛋白质，可以在漂白区域中的GFP信号之后计算感兴趣的蛋白质的移动性。然而，我们没有在我们的实验中解决这个问题;因此可以搜索其他来源的这个主题。
要比较FRAP和FLIP，这两种技术都可用于测量细胞内的蛋白质迁移率。然而，使用FRAP，在感兴趣的区域（ROI）中测量蛋白质的扩散，以观察在该区域中荧光的恢复。在FLIP中，在不同于进行漂白的区域测量荧光恢复，以观察标记的蛋白质是否能够移动到该区域，其将变得更暗，获得漂白的蛋白质。这里的主要区别在于，对于FRAP，单一漂白事件是足够的，而FLIP需要许多漂白步骤，以避免在同一区域的荧光蛋白的回流。
技术上FRAP在核和FRAP中细胞质没有区别。然而，我们测量了核内扩散系数（D = 5.6±2.8μm2/s/s）和细胞质中的扩散系数之间的差异（D = 8.6±2.2μm2//s）。这是由于这些隔室内不同的组成，由不同量的蛋白质，DNA和RNA组成。
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