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Date:
2016-02-05
[Abstract] RNA polymerase II (RNAPII) is the enzyme transcribing most of the eukaryotic protein-coding genes. Analysing the distribution and quantification of RNAPII can help understanding its function in interphase nuclei. Although several investigations in mammals indicate the organization of RNAPII in so-called ‘transcription factories’ (Jackson et al., 1993; Rieder et al., 2012; Papantonis and Cook, 2013), their existence is still controversially discussed (Zhao et al., 2014).
Recently, based on super-resolution microscopy the presence of transcription factories was also suggested in plants. Applying structured illumination microscopy (SIM) and photoactivated localization microscopy (PALM) the distribution and number of RNAPII molecules in Arabidopsis ...
[摘要] RNA聚合酶II（RNAPII）是转录大多数真核蛋白编码基因的酶。分析RNAPII的分布和定量可以帮助理解其在间期核中的功能。虽然哺乳动物中的几个研究表明RNAPII在所谓的"转录工厂"中的组织（Jackson等人，1993; Rieder等人，2012; Papantonis和Cook ，2013），但是它们的存在仍然存在争议（Zhao等人，2014）。
近来，基于超分辨率显微镜，在植物中也提出了转录工厂的存在。应用结构化照明显微镜（SIM）和光活化定位显微镜（PALM），分析拟南芥核中的RNAPII分子的分布和数目，并且发现RNAPII丰度和内源多倍体之间的正相关性（Schubert，2014; Schubert和Weisshart，2015）。
这里，我们提出了描述根据它们的内源多倍体水平通过流式分选分离拟南芥间期核的方案，随后是使用特异性抗体的双重免疫染色不同的RNAPII修饰，随后通过空间SIM和PALM评估以获得关于单一无活性和活性RNAPII分子的丰度，分布和共定位的结果。
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